DB13∕T 5348-2021 大丽花脱毒种苗生产技术规程

ICS65.020.20CCSB05DB13河北省地方标准DB13/T5348—2021大丽花脱毒种苗生产技术规程201-01-21发布2021-02-21实施河北省市场监督管理局发布DB13/T5348—2021I前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构与起草规则》的规定起草。本文件由河北省林业和草原局提出。本文件由河北农业大学起草。本文件主要起草人：陈段芬、向地英、牛善策、郝丽红、王丽霞、谷桂恕、邸葆、邓运川、梁娟。DB13/T5348—20211大丽花脱毒种苗生产技术规程1范围本文件规定了大丽花无菌苗培育、脱毒苗培养、脱毒苗快繁、原种苗培育、生产用苗繁育以及病虫害防治等内容。本文件适用于大丽花脱毒苗生产繁育环节。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程SN/T2964植物病毒检测规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1大丽花大丽花（DahliapinnataCav.）是菊科大丽花属植物。3.2脱毒原种苗脱毒组培瓶苗移栽于无病原、虫源的种苗圃内存活的植株。4无菌苗培育4.1外植体选择和处理以大丽花顶芽或带腋芽茎段为外植体材料。将外植体用市售洗洁精稀释100倍后浸泡5min，用自来水冲洗2h，之后用75%酒精浸泡30s，再用0.1%升汞处理4min～7min，并用无菌水冲洗5～8次，消毒滤纸吸干水分。4.2培养基配制培养基配制按NYT/T2306执行。DB13/T5348—202124.3接种接种操作按NY/T2306执行。4.4初代培养切取经消毒处理的茎尖接种到初代培养基中培养7天后，将无污染茎尖转接到新的初代培养基。培养基配方：MS+6-BA4mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L，在培养基中加入2g/L的活性炭。4.5继代培养初代培养产生的无菌小苗高5cm～10cm时，切取其带一对芽的茎段，接种到继代培养基上。继代培养基配方：MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L。5脱毒苗培养5.1培养基配制培养基配方为MS+6-BA4mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L。待培养基温度降至50℃～60℃后，将25mg/L病毒唑（三氮唑核苷）用经高温灭菌后的注射器以0.22μm孔径的水相滤膜过滤后加入培养基中。5.2茎尖处理切取无菌苗嫩尖，在超净工作台上，解剖镜下剥取0.2mm～0.4mm的茎尖分生组织圆锥体，置于培养基上进行暗培养，待生长点开始萌动后，转移到光照条件下进行培养。待苗高5cm～10cm时切取无菌苗嫩尖1cm，接种在添加有病毒唑的培养基上，40天后切取茎尖转移到不含病毒唑的MS+6-BA4mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L茎尖诱导培养基上进行培养。30天后转移到MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L继代培养基上。5.3病毒检测待试管苗长到5cm～10cm时，切取叶片或幼嫩组织，按SN/T2964进行病毒检测，不得检出大丽花花叶病毒(DMV)、黄瓜花叶病毒（CMV）和烟草花叶病毒（TMV）。6脱毒苗快繁6.1初代培养和继代培养经鉴定的脱毒苗按4.4和4.5给出的方法进行快繁。6.2生根培养待脱毒苗长到5cm～10cm时，截取2cm茎尖或茎段接种于生根培养基上。生根培养基配方：1/2MS+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。6.3培养条件DB13/T5348—20213光照强度30μmol·m-2·s-1～60μmol·m-2·s-1，白天温度25℃±2℃，夜间温度18℃±2℃。每天照光12h～14h。7原种苗培育7.1炼苗待脱毒苗基部有3～5条根，长度1cm～2cm时，即可进行炼苗。炼苗方法按NY/T2306执行。7.2移栽7.2.1基质准备在满足脱毒苗正常生长条件下，可因地制宜选择基质。可用草炭﹕珍珠岩﹕蛭石=2﹕1﹕1的混合材料。基质用0.5g/L多菌灵50%可湿性粉剂喷透备用。7.2.2栽植取出脱毒小苗，用清水洗掉根系表面的培养基，之后用0.1%高锰酸钾溶液快速漂洗根部，栽于苗床、营养钵或穴盘中，浇透水后用遮光率为50%的遮阳网遮荫，再用防虫网隔离。7.3移栽后管理7.3.1光照遮荫7d～10d后，光强逐渐增加到120μmol·m-2·s-1～180μmol·m-2·s-1。7.3.2温度和湿度移栽7d～10d后，保持环境温度20℃～25℃，相对湿度50%～60%。7.3.3水肥管理移栽7d～10d后，视基质状况适时浇水，基质湿度保持在60%～70%。每7d～10d施一次与MS培养基浓度一致的大量元素营养液。8生产用苗繁育8.1扦插繁殖原种苗株高30cm以上时，用消毒刀具截取带有2～4节的茎段，基部扦插于苗床、营养钵或穴盘。插后浇透水，用遮光率为50%的遮阳网遮荫，相对湿度保持75%～90%。等茎段基部生根后，逐步掀开遮阳网。8.2繁殖年限脱毒原种苗繁育生产用苗，繁殖年限限制在2～3年。8.3壮苗标准壮苗标准为：茎粗壮，节间短，无徒长；叶色深绿；须根发达，生长健壮；无病斑，无虫害。DB13/T5348—202149病虫害防治苗期主要病害有白粉病、灰霉病、褐斑病等；主要虫害有蚜虫、红蜘蛛等。施用药剂防治病虫害应符合农药合理使用准则GB/T8321（所有部分）的规定。主要病虫害防治方法见附录。DB13/T5348—20215附录A（资料性）大丽花苗期病虫害及防治方法表A.1大丽花苗期病虫害及防治方法_________________________________病虫害名称危害症状防治方法白粉病主要危害大丽花叶片和叶柄。发病叶片出现白色霉层，严重时会使叶片皱缩反卷，导致叶片脱落，整株死亡。①控制浇水，适量增施磷钾肥，加强通风，使植株生长健壮，提高抗病能力。②发病初期，摘除病叶，用50%粉锈宁可湿性粉剂800～1000倍液或70%甲基托布津1000倍液进行喷雾防治。每周1次，连续换药喷洒3～5次。灰霉病受害植株叶缘处和茎部发生近圆形至不规则形病斑，淡褐色至褐色，有时呈轮纹、水渍状，湿度大时长出灰霉。发病严重时茎部倒伏，整株死亡。①使用洁净基质育苗；避免育苗密度过大；加强通风透光；浇水时避免喷淋和苗床积水。②发病初期及时摘除病叶，并喷洒75%百菌清可湿性粉剂500倍液或40%多硫悬浮剂500～600倍液，7～10天喷洒1次，连续2～3次。褐斑病受害叶片产生褐色斑点，之后变成暗褐色，最终干枯脱落。①加强通风；适量增施磷钾肥，提高植株抗病性；控制浇水量，需要浇水应在天气晴朗的早上进行；②发病初期及时摘除烧毁病叶，喷洒75%百菌清可湿性粉剂700～800倍液或其他杀菌剂，每周1次，连续喷洒3～5次。蚜虫主要危害嫩芽和叶片，受害叶片变黄卷曲，嫩芽受到危害时生长缓慢，嫩茎扭曲，严重时生长点坏死。①悬挂黄板诱杀；②危害较重时，可用2.5%溴氰菊酯乳油1500～2000倍液或5%啶虫脒500～600倍液喷洒植株。红蜘蛛受害叶片出现黄白色小斑点，呈星点状，之后逐渐变红，造成植株生长缓慢，叶片失绿、卷曲，枯黄脱落。用40%的三氯杀螨醇乳油1500～2000倍液或50％三氯杀螨砜可湿性粉剂1500～2000倍液或40％氧化乐果1000～1500倍液喷雾防治，每隔7天喷1次，连续喷洒2～3次。