HBV-LP会议宣传用

一种新的乙肝诊断血清免疫学指标－－－－乙肝病毒大蛋白美国Ｕab大学乙型肝炎流行现状乙型肝炎是一个严重的公共卫生问题。全球60亿人口中，约1/2人口生活在HBV高流行区，约20亿人证明有HBV感染，3～4亿人为HBV慢性感染，其中25%～40%最终将死于肝硬化和肝癌。全球前10位疾病死因中乙肝占第7位，每年因乙肝死亡约75万例中国乙型肝炎流行现状(一)HBeAg阴性活动期肝炎增多(二)HBV变异株增加HBV的突变率较高，HBeAg阴性活动期肝炎临床特点：(1)转为肝硬化和肝癌比例较大；(2)与年龄相关：患者年龄较大；(3)疾病自发或持续减轻极少发生；(4)何时停药难以确定；(5)治疗后复发率高。HBeAg阴性活动期肝炎HBeAg阴性乙肝与HBeAg阳性乙肝不同点：(1)慢性肝炎病情不减轻；(2)生化学和病毒学标志反复升高；(3)可30～40年无症状；(4)约45岁左右发生肝硬化；(5)10年后约25%发生并发症。HBeAg阴性活动期肝炎HBeAg阴性的慢性乙肝流行率升高原因：(1)持续免疫压力导致突变株选择；(2)长期治疗导致病毒变异；(3)前C和C启动子变异；(4)检测方法的灵敏度提高。HBeAg阴性活动期肝炎HBeAg阴性活动期肝炎临床诊断现状：(1)传统“两对半”指标不能反映此类患者HBV复制程度；(2)缺乏指导合理治疗的指标；(3)HBVDNA检测不易于各级医疗机构广泛开展；(4)临床上急需能够反映HBV复制程度及指导治疗的指标。抗病毒治疗效果监测临床上用于抗病毒治疗的药物干扰素核苷类似物抗病毒治疗效果监测临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。以HBVDNA阴转作为治疗的终点不恰当，此时停药病情易反复。乙肝病毒实验室检测的缺陷抗病毒治疗效果评价血清学指标缺乏临床上评价抗乙肝病毒治疗效果时存在一个很大的问题，即其评价指标主要是肝功能的改善与否、血清乙肝病毒DNA水平的变化以及肝组织的病理学改变等。诚然，这些指标对临床医生判断患者病情而言非常重要和实用，也是临床医生选用抗乙肝病毒药物时的依据，然而对于何时停用抗病毒药物、停用抗病毒药物后乙肝病毒是否会重新复制活跃导致乙肝复发则缺乏客观而有效的指标。乙型肝炎血清学诊断技术新突破乙肝病毒大蛋白（HBV-LP）前S区酶免定量试剂盒-------直接定量检测乙肝大蛋白-------不用分开检测前S1和前S2HBV-LP诊断试剂新颖之处采用病毒样颗粒制作针对构象结构的高活性抗体同时检测前S1和前S2进行定量检测，用于评估抗病毒治疗效果和预后诊断HBeAg阴性活动期肝炎的唯一血清学指标评估治疗效果及判定治疗终点唯一血清学指标大蛋白完全消退意味患者预后良好乙肝病毒包膜蛋白研究进展1995-2004年发现大蛋白前S区有复杂构象结构1996年发现大蛋白具有反式激活病毒复制的作用2002年发现导致肝细胞病变及凋亡的主要原因是大蛋白2004年实验室成功构建针对构象型抗原的单克隆抗体2005年国内公司成功研制乙肝表面抗原大蛋白酶联免疫定量试剂盒HepatitisB——乙型肝炎HBV模型HBV包膜蛋白HBV的表面抗原的组成HBV病毒结构成分HBV-LP与病毒复制密切相关HBVDane管形球型血流中的分布L-HBs大蛋白存在存在不含仅病毒复制期存在M-HBs中蛋白存在存在1%含量非复制期少量存在S-HBs小蛋白存在存在存在存在根据检测血液中大蛋白的有无，判断病毒携带者体内的HBV病毒是否在进行复制。乙肝病毒包膜蛋白preS特性:(1)暴露在病毒颗粒表面(2)高免疫原性(3)参与了病毒与细胞受体的相互作用(4)诱导抗感染的保护性抗体的产生NeurathAR,KentSB,StrickN,ParkerK.Delineationofcontiguousdeterminantsessentialforbiologicalfunctionsofthepre-SsequenceofthehepatitisBvirusenvelopeprotein:itsantigenicity,immunogenicityandcell-receptorrecognition.AnnInstPasteurVirol.1988Jan-Mar;139(1):13-38.乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究PrangeR,StreeckRE.NoveltransmembranetopologyofthehepatitisBvirusenvelopeproteins.EMBOJ1995;14:247-256LambertC.etal.AssessmentofdeterminantsaffectingthedualtopologyofhepadnavirallareenvelopeproteinsJ.GeneralVirology200485,1221-1225.乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究HBV病毒颗粒表面的PreS已经被证实具有独立的结构域和天然构象很多研究致力于表达并观测PreS的结构，但是极少成功。其原因是单独表达的PreS很容易被蛋白酶所降解。(A)内质网（ER）膜上乙肝大蛋白的拓扑结构模型。(B)病毒体包膜上的乙肝大蛋白的拓扑结构模型。VolkerBruss,XuanyongLu1,ReinerThomssenandWolframH.Gerlich'.Post-translationalalterationsintransmembranetopologyofthehepatitisBviruslargeenvelopeprotein.TheEMBOJournalvol.13no.10pp.2273-2279,1994乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究HBVL包膜蛋白（大蛋白）的结构域和穿膜拓扑结构A.大蛋白的构成组分，含preS1、preS2及S结构B.大蛋白在内质网（ER）膜上的拓扑结构CarstenLambert,SylviaMannandReinhildPrange.Assessmentofdeterminantsaffectingthedualtopologyofhepadnavirallargeenvelopeproteins.JournalofGeneralVirology(2004),85,1221–1225乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究AA99－169形成一个环状结构，这一序列横跨前S1和前S2，是其主要免疫表位。乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究VolkerBrussEnvelopmentofthehepatitisBvirusnucleocapsidVirusResearch106(2004)199–20929September2004AA99－169L蛋白i-pre-S形式的功能模式图。黑点表示L蛋白pre-S结构略去S和M蛋白分泌的病毒体表面的e-pre-S结构很可能具有结合病毒受体的功能。目前的数据显示L蛋白的i-pre-S结构是一种蛋白矩阵，在病毒体的形成过程中负责与核壳体相接触，包装外膜。VOLKERBRUSS*ANDKERSTINVIELUF.FunctionsoftheInternalPre-SDomainoftheLargeSurfaceProteininHepatitisBVirusParticleMorphogenesis.JOURNALOFVIROLOGY,Nov.1995,p.6652–6657Vol.69,No.11肝炎病毒物种特异性的感染取决于病毒进入的水平，并由病毒L蛋白上的pre-S结构决定。Arg103和Ser124之间的序列在不同的HBV之间是高度保守的。Arg103和Ser124之间的pre-S序列对于HBV的形成具有重要功能。ＡＡ１０３－１２４横跨前Ｓ１和前Ｓ２之间乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究VOLKERBRUSS.AShortLinearSequenceinthePre-SDomainoftheLargeHepatitisBVirusEnvelopeProteinRequiredforVirionFormation.JOURNALOFVIROLOGY,Dec.1997,p.9350–9357Vol.71,No.12TAKASHIISHIKAWAANDDONGANEM.Thepre-SdomainofthelargeviralenvelopeproteindetermineshostrangeinavianhepatitisBviruses.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.Vol.92,pp.6259-6263,July1995DeterminationoftheMinimalDistancebetweentheMatrixandTransmembraneDomainsoftheLargeHepatitisBVirusEnvelopeProteinJournalofVirology,June2005,p.7918-7921,Vol.79,No.120022-538XＡＡ１０３－１２４形成特殊的矩阵结构跨膜区ＡＡ２５４－２７２，维持它们正常结构的最短距离是２６个ＡＡ．乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究Pre-S的反式激活作用乙肝病毒大分子表面抗原（大蛋白）是一种转录活化因子ThehepatitisBviruslargesurfaceprotein(LHBs)isatranscriptionalactivator.Virology.1996Nov1;225(1):235-9.BrunsM,MiskaS,ChassotS,WillH.EnhancementofhepatitisBVirusinfectionbynoninfectionssubviralparticles.JVirol,1998;76;1462-8.乙肝鸭模型证实由大蛋白组装成的亚病毒颗粒能够反式激活病毒继续复制这个研究具有临床意义,对于大蛋白阳性而DNA阴性患者容易停药反跳具有参考意义.亚病毒颗粒上pre-S的反式激活作用原文：UltrastructuralAnalysisofHepatitisBVirusinHepG2-TransfectedCellsWithSpecialEmphasisonSubviralFilamentMorphogenesis作者：PHILIPPEROINGEARDANDCAMILLESUREAU作者单位：LaboratoiredeBiologieCellulaire,EPCNRS117,Faculte´deMe´decinedeTours,2bisBoulevardTonnelle´,F-37032ToursCedexFrance.发表刊物：HEPATOLOGYVol.28,No.4,1998在乙肝病毒感染的HepG2细胞中对亚病毒纤维体的形态发生进行的超微结构分析大蛋白与肝细胞病变研究大蛋白的过量表达,管状颗粒在细胞内堆积,导致体外培养的细胞5天内死亡Chisari等和Fernandes等已经证实，在转基因小鼠中过量表达大的表面蛋白会使肝细胞凋亡并且产生慢性肝炎。然而，在他们模型中的这种损伤相对比较温和，没有小鼠死于肝功能衰竭.转基因小鼠的肝细胞带有这种蛋白L的积累滞留，则会发展为细胞的损伤作用，它会诱导肝的再生，在这个模型中最终导致肝癌大蛋白导致肝细胞病变研究大蛋白是导致FCH中肝细胞损伤,纤维化的主要原因FCH与肝细胞内大蛋白过量表达蛋白L的滞留也被发现和一种独特的综合症，即纤维淤胆性肝炎（FCH）相联系，它的特征为肝细胞的空气球化和有着显著的胆汁阻塞，但是它一般只有很少的炎症发生，它发生于免疫抑制的乙肝携带者。来自于发生了FCH的病人的肝脏样品，通过电镜观察发现在细胞内膜系统中有着同样的乙肝亚病毒包膜纤维体的积累。2002年国际肝病杂志实验证实，表达的乙肝大表面蛋白致使培养的肝细胞在一些天内