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医院环境卫生学及消毒效能监测院感科2014年3月3日1一、空气消毒效果监测二、手消毒效果监测三、物品和环境表面消毒效果监测四、使用中消毒液染菌量测定五、内镜消毒灭菌效果监测六、血液透析液监测七、灭菌质量监测2一、空气消毒效果监测非洁净区域空气消毒效果监测（一）采样时间：在消毒处理后，操作前进行采样。（二）采样方法：根据其采样原理分：平板暴露法和微生物采样器法。31、平板暴露法：布点方法（1）室内面积≤30m2，设置内、中、外对角线3个点，内、外布点部位距墙壁1m处；4（2）室内面积30m2，设4角及中央5点，4角布点部位距离墙壁1m处。5（3）采样方法：将血平板或普通营养琼脂平板（直径9cm)放在室内各采样点处，采样高度为距离地面1.5m，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5min,盖好立即送检。（4）检测方法：将采样后平皿置37℃±温箱培养48h,计数并鉴定。67（5）平板暴露法结果计算：因5分钟内在100cm2面积上降落的菌落数相当于10升空气中所含的菌落数，其计算公式如下：细菌菌落总数（cfu/m3）=50000N/(A×T)式中A为平板面积（cm2）；T为平板暴露时间（min);N为平板菌落数（cfu）注意事项：采样前应关好门窗和空调，无人走动情况下，静止10min再进行采样。8（6）结果判断标准值环境类别范围菌落总数cfu/m3致病菌＊Ⅰ类层流洁净手术室、层流洁净≤10cfu/m3(或0.2cfu/平板）不得检出病房普通手术室、产房、婴儿室、Ⅱ类早产儿室、烧伤病房、≤200cfu/m3(或4cfu/平板）不得检出供应室无菌区、儿科病房、妇产科检查室、注射室、急诊室、Ⅲ类换药室、治疗室、化验室、≤500cfu/m3(或10cfu/平板）不得检出供应室清洁区、各类普通病房和房间注：＊致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌9102、空气微生物采样器采样法（1）应使用符合卫生部《消毒技术规范》《医院内感染及其管理》《公共场所卫生监督监测要点》要求并推荐使用的产品。（2）计算方法：细菌菌落总数cfu/m3=平均菌落数（cfu)/每分钟采气量（L)×采样时间（min/)（3）结果判断：同平板暴露法。11（三）布点顺序：放置培养皿从总平面中最靠里的房间开始布置，依次向外，最后人员撤出。每间房间也是从房间最靠里的点开始布置，最后布置门附近的点，然后人员撤出。收取培养皿的顺序相反，从最外边的房间开始收，每间房间从门附近的培养皿开始收，最先布置的皿最后收，沉降时间略有差别。14（四）检测方法：将血平板或普通营养琼脂平板（直径9cm)放在室内各采样点处，采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上；在手术区检测时应无手术台，当手术台已固定时，检测高度应在台面之上0.25m；在100级区域检测时，采样口应对着气流方向；在其他区域检测时，采样口均向上。采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露30min,盖好立即送检.15（五）空白对照：第1次对照为培养皿对照，每监测批次中取1个培养皿做对比试验，培养皿不打开直接培养，用于检测培养皿是否合格。第2次对照为微生物室操作对照，每室或每区取1个对照皿，对操作过程对照试验，方法是模拟微生物检测操作过程，但培养皿打开后应立即封盖。两次对照结果必须为阴性。整个操作应符合无菌操作的要求。16（六）布点方法注意：乱流洁净室应尽量避开高效送风口正下方，同时布点位置应避开障碍物。1、洁净度局部百级周围千级设置13个点172、洁净度局部千级周围万级设置9个点183、洁净度局部万级周围十万级设置7个点194、洁净度局部十万级周围三十万级设置5个点205、洁净度十万级设置5个点▲▲▲▲▲21计算方法：采样后的培养皿应37℃条件下培养24h，并计算菌落数。菌落数的平均值均四舍五入选位到小数点后1位。注意手术区与周边区分别计算。22卫生部《医院洁净手术部建筑技术规范》（GB50333-2002）中洁净手术室等级标准（空态或静态）沉降法（浮游法）细菌最大平均浓度表面最大空气洁净度级别手术室等级染菌浓度名称手术区周边区手术区周边区特别洁净0.2个/30min•φ90皿0.4个/30min•φ90皿Ⅰ5个/cm2100级1000级手术室（5个/m3）（10个/m3）标准洁净0.75个/30min•φ90皿1.5个/30min•φ90皿Ⅱ5个/cm21000级10000级手术室（25个/m3）（50个/m3）一般洁净2个/30min•φ90皿4个/30min•φ90皿100000Ⅲ5个/cm210000级手术室（75个/m3）（150个/m3）级准洁净5个/30min•φ90皿Ⅳ5个/cm2300000级手术室（175个/m3）注：1、浮游法的细菌最大平均浓度采用括号内数值。细菌最大平均浓度是直接所测的结果，不是沉降法和浮游法互相换算结果。2、1级眼科专用手术室周边区按10000级要求。3、φ90皿为采样直径90mm的培养皿。23洁净辅助用房等级标准（空态或静态）沉降法（浮游法）细菌最大平等级表面最大染菌浓度空气洁净度级别均浓度Ⅰ0.4个/30min•φ90皿（10个/m3）5个/cm21000级（局部100级）Ⅱ1.5个/30min•φ90皿（50个/m3）5个/cm210000级Ⅲ4个/30min•φ90皿（150个/m3）5个/cm2100000级Ⅳ5个/30min•φ90皿（175个/m3）5个/cm2300000级24主要洁净辅助用房分级等级用房名称Ⅰ需要无菌操作的特殊实验室Ⅱ体外循环灌注准备室刷手间、消毒准备室、预麻室、一次性物品、无菌敷Ⅲ料及器械与精密仪器的存放室、护士站、洁净走廊、重症护理单元（ICU)Ⅳ恢复（麻醉苏醒）室与更衣室（二更）、清洁走廊25二、手卫生效果的监测方法（一）采样时间：在接触患者、进行诊疗活动前采样。（二）采样方法：被检者五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱水液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指跟到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30cm2，涂擦过程中同时转动棉拭子；将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，及时送检。26外科手消毒监测采样2（三）检测方法：将采样管在混匀器上振荡20秒或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，平皿内加入已溶化的45℃-48℃的营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。（四）计算方法：细菌菌落总数（cfu/cm2）=平板上菌落数×稀释倍数/采样面（cm2）28（六）结果判断：《医务人员手卫生规范》4.4手消毒效果应达到如下相应要求：卫生手清毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/㎝2外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/㎝229《医务人员手卫生规范》8．1监测要求医疗机构应每季度对手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤病房、感染疾病科、口腔科等部门工作的医务人员手进行消毒效果的监测；当怀疑医院感染暴发与医务人员手卫生有关时，应及时进行监测，并进行相应致病性微生物的检测。30三、物品和环境表面消毒效果监测（一）采样时间：在消毒处理后进行采样。（二）采样面积：被采面积＜100cｍ2取全部表面；采样面积≥100cｍ2，取100cｍ231（三）采样方法（棉拭子法、压印法两种）棉拭子法：用5×5cm的标准灭菌规格版，放在被检物体表面，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，在规格板内横竖往返均匀涂抹5次，并随之转动棉拭子，可连续采样1～4个规格板面积。剪去手接触部分，并将棉拭子放入装有10ml含相应中和剂的试管内，立即送检。门把等小型物体则采用棉拭子直接在物体表面按一定顺序涂抹采样，结果计算用cfu／件表示。321、步骤（在25cm2规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，连续采4个规格板面积）33342、检测方法：（1）细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的45～48℃的营养琼脂15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃左右温箱培养48h，计算菌落数。（2）致病菌检测检测原则：致病菌的检测依据污染情况进行相应指标的检测35（3）计算方法：细菌菌落总数（cfu/cm2)=平皿上菌落平均数×采样液稀释倍数/采样面积（cm2)36（四）结果判断标准值环境类别范围菌落总数cfu/cm2致病菌＊Ⅰ类层流洁净手术室、层流洁净病≤5不得检出房普通手术室、产房、婴儿室、Ⅱ类早产儿室、烧伤病房、≤5不得检出供应室无菌区儿科病房、妇产科检查室、注射室、急诊室、Ⅲ类换药室、治疗室、化验室、≤10不得检出供应室清洁区、各类普通病房和房间Ⅳ类传染病科及病房≤15不得检出注：＊致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。37四、使用中消毒液染菌量测定（一）采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与灭菌器械保存液；（二）采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取1.0ml被检样液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀；38（三）检测方法：1、涂抹法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀，用无菌吸管吸取上述溶液0.2ml,滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做2个平行样，一平行样板置20℃培养7d，观察霉菌生长情况，另一个平板置37℃温箱培养72h，计算菌落数，同时检测致病菌。消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上的菌落数×50392、倾注法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含相应中和剂的采样管内混匀，分别取0.5ml放入2只灭菌平皿内，加入已溶化的45℃-48℃的营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置20℃培养7d,观察霉菌生长情况；另一平板置37℃温箱培养72h，计数菌落数，同时检测致病菌。消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上的菌落数×2040（三）结果判断：使用中消毒液染菌量≤100cfu/ml,不得检出致病菌；无菌物品保存液应无菌生长。注意：采样时应无菌操作，正确选用中和剂，采样后1小时内检测。41医院需要常备消毒剂的中和剂消毒剂中和剂含氯（碘）消毒剂硫代硫酸钠（0.1%～1.0%)（有效氯或碘0.1%～0.5%)过氧乙酸溶液（0.1%～0.5%）硫代硫酸钠（0.1%～0.5%)过氧化氢溶液（1.0%～3.0%）硫代硫酸钠（0.5%～1.0%)①1%双甲酮与0.6%吗啉的混合液甲醛溶液（1%）②0.1%～0.5%亚硫酸钠③25%氢氧化钠戊二醛溶液（2%）甘氨酸（1%）或甲醛（1%）季按盐类消毒剂Tween80（0.5%～3.0%)+卵磷脂（0.1%～0.5%）（1.0%～2.0%）酚类消毒剂Tween80（0.5%～3.0%)碱类消毒剂等当量酸酸类消毒剂等当量酸酸性氧化电位水硫代硫酸钠（0.5%)+PBS(0.03mol/L)42复方消毒剂Tween80+卵磷脂+硫代硫酸钠消毒实验用试剂磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，ph7.2）无水磷酸氢二钠2.83g磷酸二氢钾1.36g将各成分加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调ph至7.2-7.4，于121℃压力蒸汽灭菌20min备用。无菌检验用洗脱液吐温-801g蛋白胨10g氯化钠8.5g将各成分加入到1000ml0.03mol/LPBS液中，加热溶解后，调ph至7.2-7.4，于121℃压力蒸汽灭菌20min备用。43五、内镜消毒灭菌效果的监测（一）采样时间：在消毒灭菌后，使用前进行。（二）采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用15ml无菌试管从活检出口收集，及时送检，2小时内检测。44446（三）检测方法：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.5ml，加入2只直径90mm无菌平皿，每