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环境卫生学监测及采样东南妇幼医院刘秀平主要内容•一、空气消毒效果的采集及监测•二、紫外线灯管消毒效果监测•三、手消毒效果监测•四、物品和环境表面消毒效果监测•五、使用中消毒液染菌量测定•六、灭菌质量监测一、空气消毒效果监测•采样时间：采用洁净技术净化空气的房间在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；未采用洁净技术净化空气的房间在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样；或怀疑与医院感染暴发有关时采样。•采样的高度：应设在距离（垂直）地面80-150cm高度范围内。非洁净区域空气消毒效果监测布点方法：1.室内面积≤30㎡，设置内、中、外对角线3个点，内、外布点部位距墙壁1m处（一条对角线上取3个点即中心一点，两端距离墙壁1cm处各取一个点）；盖盖盖•2.室内面积＞30㎡，设4角及中央5点，4角布点部位距离墙面1m处，（东、西、南、北点距离墙壁1m）。盖盖盖盖盖3.采样方法（沉降法）：将血平皿或普通营养琼脂平皿（直径9cm)放在室内各采样点处，采样高度为距离地面80-150cm，采样时将平板盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定的时间后,盖好立即送检(非洁净手术室、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病区平皿暴露15min.儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析室、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气平皿暴露5min)。4.检测方法：将采样后平皿置37℃±温箱培养48h,计数菌落数。75.注意事项：采样前应关好门窗和空调，无人走动情况下，静止10min再进行采样。（1）取培养基时，应用手托住培养基的底座，避免污染。（2）打开培养基时，盖子向下扣放于平板旁。（3）取样后将培养基的盖子盖好，方可离开治疗室。（4）送检时间不超过6h，若样品保存于0-4度条件时，送检时间不能超过24小时。（5）送检过程中如盖子不小心打开，应该重新留取标本送检。（6）结果判断•方法一：《医疗机构消毒技术规范》A.6.3•平均每皿的菌落数报告：cfu/(皿.暴露时间)1.非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病区空气中的细菌菌落总数≤4cfu/(15min.直径9cm平皿)2.儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气中的细菌菌落总数≤4cfu/(5min.直径9cm平皿)方法二：≤医院空气净化管理规范》8.2.2.2•未采用洁净技术净化空气的部门，其监测方法及结果的判断应符合GB15982的要求。（7）监测频度《医院空气净化管理规范》8.2.1•医院应对感染高风险部门每季度进行监测；洁净手术部（室）及其他洁净场所，新建与改建验收时以及更换高效过滤器后应进行监测；遇医院感染暴发怀疑与空气污染有关时随时进行监测，并进行相应致病菌微生物的检测。空气监测流程取配备好的培养皿，标准防护后进入监测部门＞30㎡的房间5个点（东、南、西、北、中）采样高度：与地面垂直80-150cm，其中东、西、南、北点距离墙壁1m≤30㎡的房间在一条对角线上取3点，即中心一点，两端各距墙1m处各取一点；采样高度：与地面垂直80-150cm9cm直径平皿暴露规定时间后，收集培养皿监测室用含氯消毒剂擦拭物体表面后关好门窗，紫外灯照射60分钟37.℃±1℃恒温箱培养48h后观察结果记录每个平皿上的菌落数计算结果（平均每平皿的军落数）：.....≤4cfu/(15min.Ф9cm平皿）.........≤4cfu/(5min.Ф9cm平皿）洁净手术室静态空气净化效果的监测手术区：Ⅰ级手术台两侧边至少各外推0.9m,两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；Ⅰ级眼科专用手术室手术区每边不小于1.2m;Ⅱ级手术台两侧边至少各外推0.6m,两端至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；Ⅲ级手术台四边至少各外推0.4m后（包括手术台）的区域；Ⅳ级不分手术区和周边区。周边区：洁净手术室内除去手术区以外的其他区域。•（一）采样时间：洁净手术室房间清洁并擦试消毒后，使净化空调系统达到自净时间并处于开启状态，然后进行测试，室内应无工作人员。•（二）监测人员要求：穿洁净服，戴口罩，手卫生。动作要轻，避免产生二次污染。（三）布点方法注意：乱流洁净室应尽量避开高效送风口正下方，同时布点位置应避开障碍物。1.洁净度局部百级周围千级设置13个点盖盖盖盖盖盖盖盖盖盖盖盖盖2.洁净度局部千级周围万级设置9个点盖盖盖盖盖盖盖盖盖3.洁净度局部万级周围十万级设置7个点盖盖盖盖盖盖盖4.洁净度三十万级设置5个点盖盖盖盖盖（四）布点顺序（沉降法）•放置培养皿从总平面中最靠近里的房间开始布置，依次向外，最后人员撤出。每间房间也是从房间最靠里的点开始布置，最后布置门附近的点，然后人员撤出。收集培养皿的顺序相反，从最外边的房间开始收，每间房间从门附近的培养皿开始收，最先布置的皿最后收，沉降时间略有差别。（五）检测方法•将平皿放在室内各采样点处，采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上；在手术区检测时应无手术台，当手术台已固定时，检测高度应在台面之上0.25m；在100级区域检测时，采样口应对着气流方向；在其他区域检测时，采样口均向上。采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露30min，盖好立即送检。采样后的培养皿应在37℃条件下培养24h，并计算菌落数。（六）计算方法•菌落数的平均值均四舍五入选位到小数点后1位。注意手术区与周边区分别计算。卫生部《医院洁净手术部建筑技术规范》（GB50333-2002）中洁净手术室等级标准（空态或静态）沉降法（浮游法）细菌最大平均浓度表面最大空气洁净度级别手术室等级染菌浓度名称手术区周边区手术区周边区特别洁净0.2个/30min•φ90皿0.4个/30min•φ90皿Ⅰ5个/cm2100级1000级手术室（5个/m3）（10个/m3）标准洁净0.75个/30min•φ90皿1.5个/30min•φ90皿Ⅱ5个/cm21000级10000级手术室（25个/m3）（50个/m3）一般洁净2个/30min•φ90皿4个/30min•φ90皿100000Ⅲ5个/cm210000级手术室（75个/m3）（150个/m3）级准洁净5个/30min•φ90皿Ⅳ5个/cm2300000级手术室（175个/m3）注：1、浮游法的细菌最大平均浓度采用括号内数值。细菌最大平均浓度是直接所测的结果，不是沉降法和浮游法互相换算结果。2、1级眼科专用手术室周边区按10000级要求。3、φ90皿为采样直径90mm的培养皿。洁净辅助用房等级标准（空态或静态）沉降法（浮游法）细菌最大平等级表面最大染菌浓度空气洁净度级别均浓度Ⅰ0.4个/30min•φ90皿（10个/m3）5个/cm21000级（局部100级）Ⅱ1.5个/30min•φ90皿（50个/m3）5个/cm210000级Ⅲ4个/30min•φ90皿（150个/m3）5个/cm2100000级Ⅳ5个/30min•φ90皿（175个/m3）5个/cm2300000级主要洁净辅助用房分级等级用房名称Ⅰ需要无菌操作的特殊实验室Ⅱ体外循环灌注准备室刷手间、消毒准备室、预麻室、一次性物品、无菌敷Ⅲ料及器械与精密仪器的存放室、护士站、洁净走廊、重症护理单元（ICU)Ⅳ恢复（麻醉苏醒）室与更衣室（二更）、清洁走廊（七）浮游菌法•可选择六级撞击式空气采样器或其他经验的空气采样器。监测时将采样器置于室内中央0.8m-1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min。房间面积＞10㎡者，每增加10㎡增设一个采样点。•计算方法：•空气中菌落总数（cfu/m3）=采样器各平皿菌落数之和（cfu）／﹛采样速率（L／min）×采样时间（min）×1000﹜•结果判断：同平板暴露法。二、紫外线灯监测•2003年11月1日，《紫外线杀菌灯》实施新的国家标准：GB19258-2003。新标准对紫外线灯强度和寿命都提出更高的要求。新灯管30w、40w辐照强度不同。•使用过程中其辐照强度逐渐降低，故应定期测试。卫生部《消毒技术规范》要求：直管紫外线灯（30w）新灯管的辐照度值在灯管下方垂直1m的中心处，应≥90uw/c㎡,使用中的灯管的辐照度值应≥70uw/c㎡。低于此值应予更换。•辐照强度检测关键参数•1.镇流器（电感、电子、基准）•2.电压•3.强度仪（253.7nm、检定）1、物理检测：紫外线灯强度仪测试•检测方法：开启紫外线灯5min后，操作者戴好防护用具，将测定波长为253.7nm的紫外线辐照计探头置于被检紫外线灯下１米处垂直照射，待仪表稳定后，所示数据即为该紫外线灯的辐射照度值。２、化学检测法：紫外线测试卡检测方法：开启紫外线灯５min后，操作者戴好防护用具，将紫外线检测尺挂在紫外线灯管中央处，开启托板，取出测试卡，放于托上，有图案的一面朝上，照射1min取下卡，观察指示卡色块的颜色，将其与标准色块比较。3，生物学检测法：1.人工染菌检查法：选定试验用的菌种在表面光滑载体上经紫外线灯照射看杀菌效果。2.自然菌空气消毒试验。选用两个相同体积房间对照，一间消毒用紫外线照射，一间用水代替消毒不照射，做空气培养，看紫外线杀菌效果。4.监测频度每季度进行一次紫外线灯管检测，特殊时随时进行。三、手的消毒效果监测•（一）采样时间：在接触患者、进行诊疗活动前采样。•（二）采样方法：被检者五指并拢,用浸有含相应中和剂的无菌洗脱水液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指跟到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30c㎡，涂擦过程中同时转动棉拭子；将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，及时送检。外科手消毒监测采样2(三)检测方法：•将采样管在混匀器上振荡20秒或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，平皿内加入已溶化的45℃-48℃的营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。(四)计算方法•细菌菌落总数（cfu/c㎡）=平板上菌落数×稀释倍数/采样面（c㎡）（五）结果判定•医务人员手卫生规范》4.4手消毒效果应达到如下相应要求：•卫生手清毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/c㎡外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/c㎡（六）监测频度•医务人员手卫生规范》8．1监测要求医疗机构应每季度对手术室、产房、导管室、层流洁净病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重症监护病房、新生儿室、母婴室、血液透析病房、烧伤病房、感染疾病科、口腔科等部门工作的医务人员手进行消毒效果的监测；当怀疑医院感染暴发与医务人员手卫生有关时，应及时进行监测，并进行相应致病性微生物的检测。医务人员手卫生监测流程采样：被检人员五指并拢将浸有无菌稀释液的棉拭子，在双手屈面从指根到指端往返涂擦2次并转动棉拭子剪去手接触的部分，将棉拭子放入10ml含相应中和剂的试管内震打数次接种平板，37℃恒温箱培养48h待看结果37℃恒温箱培养48h待看结果：细菌菌落总数（cfu/c㎡）=平皿上菌落的平均数×稀释倍数、采样面积（c㎡）四、物品和环境表面消毒效果监测•（一）采样时间：在消毒处理后进行采样。•（二）采样面积：被采面积＜100c㎡取全部表面；采样面积≥100c㎡，取100c㎡（三）采样方法（棉拭子法、压印法两种）棉拭子法：•用5×5cm的标准灭菌规格版，放在被检物体表面，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，在规格板内横竖往返均匀涂抹5次，并随之转动棉拭子，可连续采样1～4个规格板面积。剪去手接触部分，并将棉拭子放入装有10ml含相应中和剂的试管内，立即送检。门把等小型物体则采用棉拭子直接在物体表面按一定顺序涂抹采样，结果计算用cfu／件表示。（四）检测方法：•充分震荡采样管后，取不同稀释倍数的