环境卫生学监测及标本采集方法

环境卫生学监测及标本采集方法一、医院感染微生物学监测医护人员手、空气、物体表面消毒剂卫生学监测血液透析相关监测压力蒸汽灭菌效果监测医院环境卫生学监测医院消毒灭菌及医疗用品效能监测内镜消毒灭菌效果监测医疗用品的监测微生物标本的采集二、样品采集原则医院重点部门的医护人员手、空气、物表的微生物学监测应在清洁或消毒以后，医疗操作前进行。如遇有医院感染流行或疑似环境污染时，则需要立即进行监测，通过环境微生物检测，可以及时发现传染源及传播途径。测定物品污染程度或考核消毒措施的效果，都以样品所含微生物的数量来计算。因此样品采集要有代表性。送检时间一般不超过2小时。三、医院各重点部门空气，物体表面，医护人员手细菌数标准。环境类别范围标准空气（cfu/m3）物体表面（cfu/cm2）医务人员手（cfu/cm2）I类层流洁净手术室、层流洁净病房≤10≤5≤5II类普通手术室、产房、新生儿室（母婴同室病房）、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房≤200≤5≤5III类儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间≤500≤10≤5IV类传染病房－≤15≤15以上不得检出致病性微生物，如乙型溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌等。四、所用材料无菌吸管（0.5ml、5ml、10ml）、L棒、棉拭子、规格板、普通琼脂平板、10ml生理盐水等五、采样方法1、手卫生监测：采样时间：一般情况下每季度监测一次。当发生医院感染流行、高度怀疑或确定与医务人员手的污染有关时，应及时进行监测。常规监测在洗手后从事治疗操作前，特殊监测随时采样。采样方法：棉拭子涂布法和直接压印法，棉拭子涂布法被检人五指并拢，用浸湿灭菌生理盐水的棉拭子在医护人员手指曲面从指根到指端往返涂擦2次，并随之转动采样棉拭子，采完后剪去操作者手接触部分，将棉拭子投入10ml灭菌生理盐水试管内立即送检。棉拭子涂布法棉拭子涂布法棉拭子涂布法棉拭子涂布法检验方法：1、将每个采样管敲打80次或1分钟，2、用灭菌吸管取0.2ml于营养琼脂平板中，再用无菌L棒涂布整个平板表面，置36℃±1℃温箱培养24小时观察结果计算菌落数计算方法：菌落数/C㎡=平均菌落数×稀释倍数采样面积×0.2手消毒效果要求：卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/c㎡外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/c㎡直接压印法：采样时被检人5指并拢，将平皿上培养基表面直接压贴在手掌根部至指尖曲面10～20秒后送检。将所采样本直接置36℃±1℃温箱培养24小时，根据平皿面积计算细菌总数。菌落数/C㎡=平皿上菌落平均数平皿面积（C㎡）2、空气采样可根据自身条件选用沉降法（空气暴露法）或空气采样器法。采样时间：采样时选在消毒处理后，操作前进行采样，采样前应关好门窗，在无人走动的情况下，静止10分钟进行采样。沉降法：A：布点方法：室内面积＞30m2设四角及中央5点，4角的布点位置距墙壁1m处，离地面垂直高度为80-150cm。室内面积≤30m2设内、中、外对角线3点，内、外点的布点位置距墙壁1m处，离地面垂直高度为80-150cm。B：采样方法：将普通营养琼脂平板或血平板（直径9cm）放在室内各采样点处，采样高度距地面1.5m，内外及四角距墙1m，采样时，将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5分钟，盖好并将平皿置于37℃温箱培养，24小时观察结果，并计算5个平板的平均菌落数。洁净手术室则暴露30分钟。计算公式：菌落数/m3＝50000NATA＝平板面积（C㎡）T＝平板暴露于空气的时间（min）N＝平均菌落数3、物体表面的采样采样时间：根据采样目的选择采样时间，如进行常规物体表面监测，选择消毒处理后4小时内进行采样，若是暴发流行时的环境微生物学监测则尽可能对未处理的现场进行采样。采样面积：常规监测时被采面积＜100cm2，取全部表面；≥100cm2，取100cm2。暴发流行时采样不受此限制。所用材料：（1）棉拭子采样法对于平面物体，用5cm×5cm大小的标准灭菌规格版，放在被检物体表面，用用浸湿灭菌生理盐水的棉拭子在规格版内横竖往返均匀涂抹各5次，并随之转动棉拭子，连续采样1－4个规格板面积。用无菌剪刀剪去手接触部分，将棉拭子装入放有10ml灭菌生理盐水试管中。对于门把手，金属，玻璃等曲面小型物体则采用棉拭子直接在物体表面按一定顺序涂抹采样，敷料，卫生纸等一次性物品采样时，用无菌法取样品5g，放入装有10ml灭菌生理盐水试管中。检验方法：1）将采样管敲打80次（或1分钟）2）用灭菌吸管吸取0.2ml于营养琼脂平皿中，然后用无菌L棒涂在整个平皿表面，置36°C温箱24小时观察结果。计算公式：菌落数/C㎡＝平均菌落数×稀释倍数采样面积×0.24、透析液微生物监测检测方法：用无菌吸管吸取透析液进出水各2～3ml，放入无菌试管，检测时可视透析液污染程度分别取原液或10倍稀释液0.5ml放入2个灭菌平皿内，45℃～48℃的营养琼脂15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，将平板置37℃培养24小时，观察结果。细菌总数/ml＝2个平板上的菌落总数×稀释倍数评价标准：进水≤200cfu/ml出水≤2000cfu/ml5、使用中消毒剂监测为监测消毒溶液在连续使用过程中的污染菌量，应定期到各科室采样做生物学测定。采样方法：用无菌吸管吸取消毒液1ml加至装有9ml含有相应中和剂的营养肉汤内，以中和消毒药物的残效作用，中和时间10分钟至1小时。常用消毒剂中和剂及其浓度表消毒剂中和剂及其浓度甲醛亚硫酸钠（0.1%～0.5%）氨水双甲酮（0.1%～1.0%）+吗啉（0.6%～1.0%）戊二醛甘氨酸（1.0%）；赖氨酸亚硫酸钠（0.1%～0.5%）双甲酮（0.1%～1.0%）+吗啉（0.6%～1.0%）过氧乙酸硫代硫酸钠（0.1%～0.5%）含氯消毒剂类硫代硫酸钠（0.1%～1.0%）季铵盐类吐温－80（0.5%～3.0%）卵磷脂（0.3%）硫代硫酸钠（0.1%～0.5%）亚硫酸钠（0.1%～0.5%）碘（溴）制剂亚硫酸钠（0.1%～0.5%）；卵磷脂（0.1%～0.3%）硫代硫酸钠（0.1%）；半胱氨脂（0.1%）酚类吐温－80（1%～10%）；卵磷脂（0.1%～0.3%）氯已定卵磷脂（1.0%～2.0%）汞制剂硫代硫酸钠；亚硫酸钠；半胱氨脂（0.1%）醇类吐温－80酸类碱类碱类酸类用无菌吸管吸取中和采样液0.2ml，转种于营养琼脂平板中，用L棒涂抹于普通琼脂平板，置36℃温箱培养48小时观察结果。菌落数/ml＝平均菌落数×稀释倍数0.2结果判断•使用中消毒液细菌菌落总数应≤100cfu/ml，不得检出致病微生物。•无菌器材保存液必须无菌生长。6、压力蒸汽灭菌效果监测指示菌：嗜热脂肪杆菌芽胞（产品应根据厂家说明书在有效期内使用）方法：灭菌完毕，取出自含式生物指示物，至少冷却10分钟以上，将安瓿折断或挤破，让管内溴甲酚紫蛋白胨水培养基与嗜热脂肪杆菌芽胞菌片融为一体，同时将一未经灭菌的生物指示物一同培养，56℃48小时后进行灭菌效果判定。效果判定阳性对照阴性对照试验管结果黄紫紫灭菌认可黄紫黄灭菌失败7、内镜消毒灭菌效果监测采样时间：消毒、灭菌后，使用前。采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用无菌试管从活检出口收集，及时送检。检测方法：将送检液充分震荡，取0.5ml，加入2只直径90mm无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的45℃左右营养琼脂15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于35℃培养48小时后计数。细菌菌落数/件＝2个平皿菌落数平均值×208、医疗用品的监测包括一次性医疗用品和消毒灭菌处理后的医疗用品。采样时间：在消毒或灭菌处理后存放至有效期内采样。采样方法：操作人员在认真清洁消毒手后，在净化台内用无菌的方法，将拟检测的医疗用品：缝合针、针头、手术刀片等小件物品投入5ml灭菌的生理盐水或营养肉汤内，对手术钳、镊子等大的医疗器械在无菌操作下用沾有无菌生理盐水的棉拭子反复涂擦采样，并将棉拭子投入5ml灭菌的生理盐水溶液中。检测方法：将采样管振打80次，用无菌吸管吸取1ml待检样品于灭菌平皿内，加入已融化的45℃左右的营养琼脂15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置37℃温箱培养48小时，观察结果。若平皿上无菌生长为灭菌合格。所用材料微生物让人类步步为营，我们应该追求：“准确的病原学诊断”“针对性病原学治疗”正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提基本原则1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检5.棉拭子标本宜用运送培养基7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂.8.送检标本应注明来源和检验目的正确留取细菌培养的临床标本血液标本血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。正常人的血液是无菌的，如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌（排除采集标本或其他操作过程污染），提示有菌血症或败血症。1、采血时间及次数一般应在抗生素治疗前，发热初期或高峰时抽血。伤寒患者应在发热一星期内抽血。化脓性脑膜炎应在发热1～2天内抽血，亚急性心内膜炎的患者除在发热期采血外，要多次抽血（24小时内3～４次）和增加抽血量（可增至10毫升）。2、抽血部位及抽血量以无菌方法从患者肘静脉、股动脉采血。采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血5～10ｍｌ，婴儿为1～2ｍｌ，血液抽出后，立即以无菌手续注入血培养瓶，充分混合后送检。采血培养前质量保证:静脉穿刺程序1.70%酒精擦拭静脉穿刺点30秒钟2.1%2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒,从穿刺点向外画圈消毒,直径3cm3.70%酒精脱碘培养瓶接种程序1.70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞,待60秒2.用无菌纱布清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。1.皮肤消毒尤为重要，因为其主要的病原菌为皮肤定植菌如凝固酶阴性的葡萄球菌2.在穿刺前或穿刺期间，防止静脉滑动，用戴乳胶手套固定静脉，不可接触静脉穿刺点3.用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头（如果行第二次穿刺，应换针头）直接注入血培养瓶。血培养瓶在采血接种后必须马上送检血培养瓶在采血接种后在室温中不得超过数小时血培养瓶不得在采血接种后放入冰箱或冷冻正确留取细菌培养的临床标本骨髓标本正常人的骨髓是无菌的，若从患者骨髓中检出细菌（排除污染）提示细菌性骨髓炎或菌血症、败血症。◆标本采集1、标本采集部位和时间一般用骨髓穿刺针从髂骨采集骨髓标本，最好在用药前，发热初期或高热期采集，阳性检出率较高。2、标本采集注意事项：⑴严格无菌操作。⑵标本采集后立即注入血培养瓶，送检。正确留取细菌培养的临床标本我国痰细菌培养现状标本送检率低结果重复性差报告速度慢感染菌与污染菌不易区分药敏结果与治疗反应存在差距咳痰标本正确留取细菌培养的临床标本咳痰标本不合格，你退检吗？如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于10个，应不做或仅在特殊要求时做培养。如做培养，报告中注明“镜检结果表明标本口咽分泌物污染明显”。复旦大学中山医院的做法痰液外观：脓性，粘脓，粘液，水样…..痰标本质量评价：合格，不理想（建议重送）临床上约半数咳痰标本不合格！正确留取细菌培养的临床标本痰标本痰标本的细菌学检查对于呼吸道感染的诊断有重要意义。下呼吸道的痰液是无菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿链）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病菌，提示有呼吸道细菌感染。◆标本采集1、痰标本的采集时间一般以晨痰为好。2、标本采集方法⑴自然咳痰法：在留取痰之前，用温开水反复漱口，以减少常居菌的污染，应从气管深部咳出痰，吐入痰杯内。正确留取细菌培养的临床标本⑵导管痰：气管插管的病人用一次性吸痰管直接取标本，用消毒后的手术剪剪取１寸吸痰管1～2根于无菌试管内送检。⑶结核分枝杆菌标本收集法：留取即时痰、夜痰、晨痰各一次一天送检