GHT 1291-2020 花椒及花椒加工产品 花椒酰胺总含量的测定 高效液相色谱法

ICS67.220.10B36GH中华人民共和国供销合作行业标准GH/T1291—2020花椒及花椒加工产品花椒酰胺总含量的测定高效液相色谱法Pricklyashanditsprocessedproducts—Determinationoftotalfagaramide—Highperformanceliquidchromatography2020-06-04发布2020-09-01实施中华全国供销合作总社发布GH/T1291—2020I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准的附录A是资料性附录。本标准由中华全国供销合作总社提出。本标准由全国辛香料标准化技术委员会（SAC/TC408）归口。本标准起草单位：中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院、陕西为康食品科技股份有限公司、晨光生物科技集团股份有限公司、驻马店市王守义十三香调味品集团有限公司、山东百佳食品有限公司、中国食品土畜进出口商会调料分会。本标准主要起草人：刘英杰、刘强、杨清山、张慧、赵伯涛、刘继华、武亚明、程远欣、王银良、王艳改、黄晓德、吴耀军、苏海、李漪。GH/T1291—20201花椒及花椒加工产品花椒酰胺总含量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了花椒及花椒加工产品中花椒酰胺类物质总含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于花椒及花椒加工产品的分析与检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T12729.2香辛料和调味品取样方法GB/T12729.3香辛料和调味品分析用粉末试样的制备3术语与定义3.1花椒加工产品pricklyashproducts花椒经粉碎、萃取等工艺生产的产品。主要包括花椒粉、花椒油树脂、花椒油等以花椒为原料加工的产品。3.2花椒酰胺fagaramide花椒呈麻味的主要成分，含有羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素和羟基-ε-山椒素等多种酰胺类成分。4原理花椒酰胺类物质主要包含羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素和羟基-ε-山椒素等酰胺类组分，试样中的花椒酰胺类成分经甲醇提取后，通过C18柱分离，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪在270nm处测定，以羟基-α-山椒素作为对照品，通过峰面积外标法对样品中的花椒酰胺总量进行测定。5试剂材料与仪器设备5.1试剂材料5.1.1乙腈：色谱纯。5.1.2甲醇：色谱纯。5.1.3冰醋酸：分析纯。GH/T1291—202025.1.4羟基-α-山椒素，CAS号:83883-10-7，纯度≥95%。5.1.5微孔滤膜，孔径0.22μm有机相滤膜。5.2仪器设备5.2.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。5.2.2分析天平，感量0.0001g,0.00001g。5.2.3水浴锅。5.2.4超声清洗器，超声功率240W。5.2.5高速粉碎机，转速≥10000rpm。6样液制备6.1标准溶液制备取羟基-α-山椒素对照品10mg（精确至0.1mg），置于烧杯中，用色谱级甲醇溶解，定容至10mL；用色谱级甲醇稀释制成浓度为5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的对照品工作溶液，待测。6.2样品液制备6.2.1干花椒取混合均匀的花椒粒100g，用高速粉碎机粉碎后过20目筛，混匀。称取1g（精确至0.0001g）粉碎混匀后的样品置于具塞烧瓶中，加甲醇50mL，超声萃取0.5h，冷却至室温，转移至100mL容瓶，甲醇定容，移取上清液10mL于50mL容量瓶定容，经0.22μm滤膜过滤，待测。6.2.2鲜花椒取混合均匀的鲜花椒粒200g。经组织捣碎机捣碎后，称取5g(精确至0.0001g）粉碎混匀后的样品置于具塞烧瓶中，加甲醇50mL，超声萃取0.5h，冷却至室温，转移至100mL容瓶，甲醇定容，移取上清液10mL于50mL容量瓶定容，经0.22μm滤膜，待测。6.2.3花椒粉称取1g(精确至0.0001g）粉碎混匀后的样品置于具塞烧瓶中，加甲醇50mL，超声萃取0.5h，冷却至室温，转移至100mL容瓶，甲醇定容，经0.22μm滤膜过滤，待测。6.2.4花椒油树脂取膏状或固体油树脂样品置于50℃水浴锅中溶解，摇匀。精密称取0.2g（精确至0.0001g）样品置于烧杯中，加甲醇50mL，超声萃取0.5h，冷却至室温，转移至100mL容瓶，甲醇定容，经0.22μm滤膜过滤，待测。6.2.5花椒油花椒油摇匀，精密称取0.2g（精确至0.0001g）置于具塞烧瓶中，加甲醇50mL，超声萃取0.5h，冷却至室温，转移至100mL容瓶，甲醇定容，0.22μm滤膜过滤，待测。7分析计算GH/T1291—202037.1色谱条件——色谱柱：C18反相柱，4.6×150mm，5.0μm，或性能相当者。——流动相：乙腈∶1%冰醋酸水溶液（40:60，V/V）。——流速：1.5mL/min。——柱温：40℃。——进样量：20μL。——检测波长：270nm。7.2标准曲线的绘制按测定条件（7.1）对系列对照品工作溶液（6.1）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应工作溶液的以浓度为横坐标，绘制标准曲线。7.3样品测定按测定条件（7.1）对样品液（6.2）进行测定，样品液中的花椒酰胺根据保留时间和光谱定性。由样品液的花椒酰胺类物质的特征峰总面积，从标准曲线上查出相应的羟基-α-山椒素浓度，样品液的响应值应在仪器测定的线性范围之内，超出线性范围的供试样品液需用甲醇稀释后测定。7.4结果计算以4种花椒麻酰胺类物质面积总和作为供试品中花椒麻酰胺面积。供试品中花椒麻酰胺总含量以羟基-α-山椒素计，按公式（1）计算。3-10mCVKX...........................................................................(1)式中：X——供试品中花椒酰胺总含量，单位为毫克每克（mg/g）；C——供试品溶液中花椒麻素的峰面积对应的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——供试样品工作液定容体积，单位为毫升（mL）；K——供试样品工作液稀释倍数；m——供试品的称样量，单位为克（g）；取重复性条件下获得的绝对差值不大于算术平均值的5%的两次测定值的算术平均值作为测定结果，结果保留小数点后2位。GH/T1291—20204AA附录A（资料性附录）典型高效液相色谱图A.1羟基-α-山椒素典型高效液相色谱图见图A.1。注：1羟基-α-山椒素图A.1羟基-α-山椒素典型高效液相色谱图A.2样品液典型高效液相色谱图见图A.2。注：1羟基-ε-山椒素2羟基-α-山椒素3羟基-β-山椒素4羟基-γ-山椒素图A.2样品液典型高效液相色谱图_________________________________