GBT 17335-1998 食品中栀子黄色素的测定

GB/T17335－1998前言栀子黄作为食品着色剂已经列入GB2760—1996食品添加剂使用卫生标准，最大使用量0.3g/kg。目前日本用气相色谱方法测定，我们用高压液相色谱法测定。本方法快速、准确、精密度好。本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准由中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责起草；卫生部食品卫生监督检验所参加起草。本标准主要起草人：李严巍、王梅、杨祖英。本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。中华人民共和国卫生部1998—04—20批准1999—01—01实施GB/T17335－1998中华人民共和国国家标准食品中栀子黄的测定DeterminationofcrocininfoodsGB/T17335—19981范围本标准规定了食品中栀子黄色素的高效液相测定方法和薄层色谱法。本标准适用于饮料、酒、糕点中栀子黄的测定。第一法高效液相色谱法2原理样品中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，栀子甙是栀子黄的主要成分，为对照品。3试剂试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3．1甲醇。3．2石油醚：60～90℃。3．3乙酸乙酯。3．4三氯甲烷。3．5姜黄色素。3．6栀子甙。3．7栀子甙标准溶液：称取2.75mg栀子甙标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL混匀。即得27.5μg/mL栀子甙。3．8栀子甙标准使用液：分别吸取栀子甙标准溶液0，2.0，4.0，6.0，8.0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL，即得0，5.5，11.0，16.5，22.0μg/mL的栀子甙标准系列溶液。4仪器4．1小型粉碎机。4．2恒温水浴。4．3高效液相色谱系统：WaterˊsM501泵，U6K进样器，岛津RF-535。荧光检测器，Bluechip/PC计算机和Baseline810色谱控制程序。5分析步骤5．1样品处理5．1．1饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜0.4μm过滤，滤液备作HPLC分析用。5．1．2酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。5．1．3糕点：称取10g样品放入100mL的圆底烧瓶中，用50mL石油醚加热回流30min，置室温。砂芯漏斗过滤，用石油醚洗涤残渣5次，洗液并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取3～5次，每次30mL，直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。5．2测定5．2．1HPLC参考条件中华人民共和国卫生部1998—04—20批准1999—01—01实施中华人民共和国卫生部1998—04—20批准1999—01—01实施GB/T17335－1998色谱柱：粒度5μmODSC18150mm×4.6mm流动相：甲醇﹕水（35﹕65）流速：0.8mL/min波长：240mm5．2．2标准曲线在本实验条件下，分别注入栀子甙标准使用液0，2，4，6，8μL，进行HPLC分析，然后以峰高对栀子甙浓度作标准曲线。5．2．3样品测定在实验条件下，注入5μL“5.1”项下的样品处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得样品中栀子甙含量。6结果6．1计算按式（1）计算。X=1000××mVA…………………………………………（1）式中：X——样品中栀子黄色素的含量，g/kg；A——进样液中栀子甙的含量，μg；V——样品制备液体积，mL；m——样品质量，g。6．2本标准的检测限、回收率、精密度。本方法栀子甙的检测限为3.2μg/mL，栀子黄色素浓度在0.2～0.3g/kg范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为94.1%，92%，91.3%。相对标准差（R.S.D）%：2.69,4.70,3.20。第二法薄层色谱法1原理小样品中栀子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓缩点样展开后，在UV254nm灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。2试剂所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。2．1甲醇。2．2乙醇。2．3乙酸乙酯。2．4丙酮。2．5甲酸。2．6三氯甲烷。2．7硅胶GF254：薄层色谱用。2．8展开剂：乙酸乙酯：丙酮：甲醇：水（5：5：1：1）。2．9展开剂：三氯甲烷：甲醇（6：3）。3仪器中华人民共和国卫生部1998—04—20批准1999—01—01实施GB/T17335－19983．1全玻璃浓缩器。3．2薄层板涂布器。3．3玻璃板，4cm×20cm，20cm×20cm。3．4层析缸。3．5UV254nm荧光灯。3．6微量注射器。4操作方法4．1样品处理：将酒、饮料、蛋糕、样品处理后，进行TLC检识。见5.2.2展开结果。4．1．1酒：取样品100mL，减压浓缩至无酒味，然后用乙酸乙酯萃取，每次30mL，萃取3～5次，至无栀子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味。约剩20mL为止，此液留作薄层分析用。4．1．2饮料：取样品100mL，用乙酸乙酯萃取，每次50mL，萃取3～5次，至无栀子黄颜色为止。合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味，约剩20mL，此液留作薄层分析用。4．1．3蛋糕：称取10.0g已粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品（用手摸已干燥即可），加入50mL石油醚搅拌，放置片刻，弃去石油醚，如此反复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，放入索式提取器，用甲醇提取色素，直到无栀子黄色素为止，直至色素全部提完，置水浴浓缩至约5mL，此液留作薄层层析用。4．2测定4．2．1点样：取市售硅胶GF254荧光板，离板底边2cm处点样品提取液0.5μL，板的右边点2μL栀子黄色素标准溶液.4.2.2展开:将4.2.1项已点好样和标准板,用2.8,2.9展开剂展开,待栀子黄色素明显分开后取出,晾干,与标准斑点比较,栀子黄Rf值为0.64和0.50。而姜黄色素为0.11和0.15。样品与标品的斑点的Rf值一致，则证明样品中的色素为栀子黄色素。中华人民共和国卫生部1998—04—20批准1999—01—01实施中华人民共和国卫生部1998—04—20批准1999—01—01实施GB/T17335－1998中华人民共和国卫生部1998—04—20批准1999—01—01实施