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ICSG中华人民共和国国家标准GB29690—2013食品安全国家标准动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物残留量的测定液相色谱-串联质谱法DeterminationofmarkerresiduesofNicarbazininanimalderivedfoodbyLiquidChromatography-tandemMassSpectrometricmethod（电子版本仅供参考，以标准正式出版物为准）2013-09-16发布2014-01-01实施中华人民共和国农业部中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布I目次目次.....................................................................................................................................................I前言....................................................................................................................................................II动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物残留量的测定液相色谱-串联质谱法...................................１1范围..................................................................................................................................................１2规范性引用文件..............................................................................................................................１3原理..................................................................................................................................................１4试剂和材料......................................................................................................................................１5仪器和设备......................................................................................................................................２6样品的制备与保存..........................................................................................................................３6.1样品的制备.................................................................................................................................３6.2样品的保存.................................................................................................................................３7测定步骤........................................................................................................................................３7.1提取与净化...................................................................................................................................３7.2标准曲线的制备.........................................................................................................................３7.3测定.............................................................................................................................................４7.4空白试验.....................................................................................................................................５8结果计算和表述............................................................................................................................５9检测方法灵敏度、准确度和精密度..............................................................................................６9.1灵敏度.........................................................................................................................................６9.2准确度.........................................................................................................................................６9.3精密度.........................................................................................................................................６附录A..................................................................................................................................................７II前言本标准的附录A为资料性附录。本标准系国内首次发布的国家标准。１动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物4,4-二硝基苯缩脲残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于鸡的肌肉组织和鸡蛋中尼卡巴嗪残留标志物4,4’-二硝基均二苯脲残留量的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1.1-2000标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中残留的4,4-二硝基苯缩脲，用乙腈提取，正己烷除脂，75％甲醇水溶液萃取，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。4试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水。4.14,4’-二硝基均二苯脲对照品：含量≥98.0％。4.24,4’-二硝基均二苯脲-D8对照品：含量≥98.0％。4.3乙腈：色谱纯。4.4甲醇：色谱纯。4.5无水硫酸钠4.6正己烷4.7乙酸铵２4.8二甲基甲酰胺4.90.1mol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵1.93g，用水溶解并稀释至250mL。4.1075％甲醇水溶液：取甲醇75mL，用水溶解并稀释至100ml。4.1175％甲醇水溶液饱和的正己烷取75％甲醇水溶液100mL，加正己烷100mL，摇匀，静置分层，取上层液。4.121mg/mL4,4’-二硝基均二苯脲标准贮备液精密称取4,4’-二硝基均二苯脲对照品10mg，于10mL量瓶内，用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1mg/mL的4,4’-二硝基均二苯脲标准贮备液。2～8℃保存，有效期3个月。4.1310μg/mL4,4’-二硝基均二苯脲标准工作液：精密量取1mg/mL4,4’-二硝基均二苯脲标准贮备液1.0mL，于100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL的4,4’-二硝基均二苯脲标准工作液。-18℃保存，有效期3个月。4.141mg/mL4,4’-二硝基均二苯脲-D8标准贮备液：精密称取4,4’-二硝基均二苯脲-D8对照品10mg，于10mL量瓶内，用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1mg/mL的4,4’-二硝基均二苯脲-D8标准贮备液。2～8℃保存，有效期3个月。4.1510μg/mL4,4’-二硝基均二苯脲-D8标准工作液：精密量取1mg/mL4,4’-二硝基均二苯脲-D8标准贮备液1.0mL，于100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL的4,4’-二硝基均二苯脲-D8标准工作液。-18℃保存，有效期3个月。5仪器和设备5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.00001g。5.3天平：感量0.01g。5.4涡旋振荡器5.5离心机5.6氮吹仪5.7离心管：50mL。5.8滤膜：0.2µm。３6试料的制备与保存6.1试料的制备6.1.1鸡蛋取适量新鲜或冷藏的空白或供试鸡蛋，去壳，并使均质。——取均质后的供试样品，作为供试试料。——取均质后的空白样品，作为空白试料。——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.1.2鸡肌肉取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。——取均质后的供试样品，作为供试试料。——取均质后的空白样品，作为空白试料。——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2试料的保存-20℃以下保存。7测定步骤7.1提取与净化称取试料（2±0.02）g，于50mL离心管中，添加10μg/mL4,4’-二硝基均二苯脲-D8标准工作液适量，加无水硫酸钠2g，乙腈8mL，涡旋0.5min，超声5min，5000r/min离心10min，取上清液，于40℃氮气吹干，加75％甲醇水溶液