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书书书犐犆犛１９．１２０犃２８中华人民共和国国家标准犌犅／犜３８５１７—２０２０颗粒 生物气溶胶采样和分析 通则犘犪狉狋犻犮狌犾犪狋犲—犅犻狅犪犲狉狅狊狅犾狊狊犪犿狆犾犻狀犵犪狀犱犪狀犪犾狔狊犻狊—犌犲狀犲狉犪犾狆狉犻狀犮犻狆犾犲狊２０２００３０６发布２０２００６０１实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会发布目 次前言Ⅰ…………………………………………………………………………………………………………引言Ⅱ…………………………………………………………………………………………………………１ 范围１………………………………………………………………………………………………………２ 规范性引用文件１…………………………………………………………………………………………３ 术语和定义１………………………………………………………………………………………………４ 生物气溶胶采样３………………………………………………………………………………………… ４．１ 概述３………………………………………………………………………………………………… ４．２ 生物气溶胶采样方法３……………………………………………………………………………… ４．３ 生物气溶胶采样方法的选择４……………………………………………………………………… ４．４ 生物气溶胶采样器的选择５………………………………………………………………………… ４．５ 采样辅助器材５……………………………………………………………………………………… ４．６ 采样程序６……………………………………………………………………………………………５ 生物气溶胶分析８………………………………………………………………………………………… ５．１ 生物气溶胶的定性分析８…………………………………………………………………………… ５．２ 生物气溶胶的定量分析９……………………………………………………………………………附录Ａ（资料性附录） 生物气溶胶采样器的性能和选择原则１２…………………………………………附录Ｂ（资料性附录） 生物气溶胶采样和定量分析（培养分析法）记录１３………………………………参考文献１８……………………………………………………………………………………………………犌犅／犜３８５１７—２０２０前 言 本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由全国颗粒表征与分检及筛网标准化技术委员会（ＳＡＣ／ＴＣ１６８）提出并归口。本标准起草单位：军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所、青岛众瑞智能仪器有限公司、中国科学院过程工程研究所、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、中国检验检疫科学研究院、山东农业大学、复旦大学、安徽宾肯电气股份有限公司、北京拓普天成科技发展有限公司、天津市春信净化制冷设备有限公司。本标准主要起草人：李劲松、李娜、何春雷、李兆军、周兰、胡凌飞、杨文慧、刘凡、胡孔星、柴同杰、隋国栋、张柯、靳爱军、叶佳、王洋、李秋实。Ⅰ犌犅／犜３８５１７—２０２０引 言 本标准为环境空气中细菌、病毒、真菌和毒素等不同特性的生物气溶胶（也称之为空气微生物）的采样提供了采样方法和生物气溶胶的分析，其中，采样方法包括采样原理、采样器的选择和采样过程中应关注的问题；分析方法包括分析方法的类型、方法的适用性、分析结果的表达方式。在附录Ａ中提供采样器性能和选择的原则；在附录Ｂ中提供生物气溶胶采样全过程的记录表格。Ⅱ犌犅／犜３８５１７—２０２０颗粒 生物气溶胶采样和分析 通则 警示———在使用本标准过程中可能涉及有危害性的生物成分、操作和设备。本标准没有包含使用本标准时应注意的生物安全问题，使用者在使用本标准前应当根据采样目的和采样环境的生物危害风险，采取适当的生物安全防护措施。１ 范围本标准规定了环境空气中细菌、病毒、真菌和毒素等不同特性的生物气溶胶的采样和分析方法的通用原则。本标准适用于环境空气中的生物气溶胶的采样和分析。２ 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ１６２９３ 医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法ＧＢ／Ｔ１６２９４ 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法ＧＢ／Ｔ１８２０３ 室内空气中溶血性链球菌卫生标准ＧＢ／Ｔ１８２０４．３ 公共场所卫生检验方法 第３部分：空气微生物ＧＢ５０５９１ 洁净室施工及验收规范３ 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。３．１微生物 犿犻犮狉狅狅狉犵犪狀犻狊犿个体难以用肉眼观察的一切微小生物的统称。 注１：引自全国科学技术名词审定委员会公布的《微生物学名词》（第二版）。 注２：本标准所指微生物仅包括细菌、真菌、病毒。３．２细菌 犫犪犮狋犲狉犻犪以细胞壁含胞壁酸，膜脂为酯键脂、ＲＮＡ聚合酶无Ⅱ型启动子等为主要特征的原核生物的总称。 注：引自全国科学技术名词审定委员会公布的《微生物学名词》（第二版）。３．３病毒 狏犻狉狌狊由ＲＮＡ或ＤＮＡ及蛋白质等组成的，专营细胞内感染和复制的一大类结构简单的微生物。 注：引自全国科学技术名词审定委员会公布的《微生物学名词》（第二版）。３．４真菌 犳狌狀犵犻无叶绿素、有细胞壁、营吸收营养的真核生物。普遍以有性和无性两种方式产生孢子进行繁殖，通１犌犅／犜３８５１７—２０２０常为丝状且有分枝的体细胞结构，一般都有细胞壁。 注：引自全国科学技术名词审定委员会公布的《微生物学名词》（第二版）。３．５孢子 狊狆狅狉犲真菌或细菌中能直接发育成新个体的微小繁殖单元。 注：引自全国科学技术名词审定委员会公布的《微生物学名词》（第二版）。３．６毒素 狋狅狓犻狀生物产生的、对他种生物体有毒性的产物。 注１：改写自全国科学技术名词审定委员会公布的《微生物学名词》（第二版）。 注２：毒素从来源分有微生物毒素、植物毒素和动物毒素三类。３．７生物气溶胶 犫犻狅犪犲狉狅狊狅犾含有生物性成分的固体或液体微粒悬浮于气体介质中形成的稳定分散系。 注：生物性成分包括细菌、病毒、真菌、孢子、毒素等。生物气溶胶粒子粒径在０．０１μｍ～１００μｍ之间。３．８粒子空气动力学粒径 狆犪狉狋犻犮犾犲犪犲狉狅犱狔狀犪犿犻犮犱犻犪犿犲狋犲狉某一种粒子，无论其形状、大小和密度如何，在空气中的沉降速度与一种密度为１ｇ／ｃｍ３的球形粒子的沉降速度一致时的该粒子的直径。３．９采样介质 犮狅犾犾犲犮狋犻狅狀犿犲犱犻犪用来捕获、承载生物气溶胶粒子的物质。 注：采样介质一般具有稳定性、粘附性、无毒性、抗蒸发、水溶性等基本性能。３．１０菌落 犮狅犾狅狀狔在固体基质表面或内部形成的紧密生活在一起肉眼可见的同一微生物物种的群体，或来源于同一细胞的一群细胞。 注：引自全国科学技术名词审定委员会公布的《微生物学名词》（第二版）。３．１１菌落形成单位 犮狅犾狅狀狔犳狅狉犿犻狀犵狌狀犻狋；犆犉犝根据固体培养基上形成的菌落数，测定样品中活菌浓度的单位。 注１：引自全国科学技术名词审定委员会公布的《微生物学名词》（第二版）。 注２：一个菌落形成单位能从单个微生物形成，也可以是多个微生物的聚集体或者是一个或者多个微生物黏附在一个粒子上。 注３：生长出的菌落数量跟培养条件有关。３．１２菌落总数 犮狅犾狅狀犻犲狊狀狌犿犫犲狉菌落生长总数在一定条件下（如需氧情况、营养条件、ｐＨ、培养温度和时间等）单位质量或单位体积样本所生长出来的、能被肉眼识别的微生物生长物数量。３．１３噬斑 狆犾犪狇狌犲病毒感染人工培养的单层细胞后由单个病毒粒子所产生的细胞裂解区。 注：引自全国科学技术名词审定委员会公布的《微生物学名词》（第二版）。２犌犅／犜３８５１７—２０２０３．１４噬斑形成单位 狆犾犪狇狌犲犳狅狉犿犻狀犵狌狀犻狋；犘犉犝每单位体积或重量的病毒悬液所能形成的噬斑数。 注：引自全国科学技术名词审定委员会公布的《微生物学名词》（第二版）。４ 生物气溶胶采样４．１ 概述生物气溶胶的浓度、粒径、活性等具有不确定性和不稳定性，不同的生物成分对采样过程的耐受力差异很大，生物成分的分析方法也不相同。因此，在充分考虑生物气溶胶上述特点外，结合采样环境和采样目的，决定采样方法和选用采样器种类。生物气溶胶采样器的性能和选择原则参见附录Ａ。４．２ 生物气溶胶采样方法４．２．１ 撞击式采样利用惯性作用，通过喷嘴、喷口或裂隙的加速作用把生物气溶胶粒子采集到固体介质表面的气溶胶采集方式。４．２．２ 冲击式采样能够使具有足够大惯性的生物气溶胶粒子撞击液体并进入液体介质中的气溶胶采集方式。４．２．３ 滤膜采样生物气溶胶粒子通过各种滤材时，滤材小孔对粒子的阻留或／和滤材对粒子的静电吸引阻留作用，将粒子捕获在滤材上的采集方式。４．２．４ 离心式采样一种让气体以高速旋转所产生的离心力将生物气溶胶粒子与气流分开并撞击到固体介质表面上或富集到液体介质里的采集方式。 注：液体介质的离心采样也称之为气旋式采样。４．２．５ 大流量采样以２００Ｌ／ｍｉｎ以上的采样流量把生物气溶胶采集到液体里或固体介质上的采样方式。４．２．６ 静电吸附采样用多种方法使生物气溶胶粒子带上电荷，在电场的作用下通过静电吸附收集生物气溶胶粒子的采集方法。４．２．７ 自然沉降采样生物气溶胶粒子在重力作用下自然下沉降落到采样面（即微生物营养琼脂平皿表面）的采集方式。３犌犅／犜３８５１７—２０２０４．３ 生物气溶胶采样方法的选择４．３．１ 细菌气溶胶采样方法４．３．１．１ 细菌气溶胶定性分析采样方法细菌气溶胶的定性分析，即细菌生物学特性分析。可选择撞击式采样、冲击式采样、滤膜采样、离心式采样、静电吸附采样等方法。４．３．１．２ 细菌气溶胶定量分析采样方法细菌气溶胶的定量分析，即细菌气溶胶的细菌总数分析。可选择撞击式采样、冲击式采样、离心式采样、静电吸附采样、自然沉降采样等方法。其中，自然沉降采样法仅限于洁净环境或外界干扰小的环境采样。４．３．２ 真菌气溶胶采样方法４．３．２．１ 真菌气溶胶定性分析采样方法真菌气溶胶的定性分析，即真菌生物学特性分析。可选择撞击式采样、冲击式采样、滤膜采样、离心式采样等方法。４．３．２．２ 真菌气溶胶定量分析采样方法真菌气溶胶的定量分析，即真菌总数分析。可选择撞击式采样、冲击式采样、滤膜采样、离心式采样、自然沉降采样等方法。４．３．３ 病毒气溶胶采样方法４．３．３．１ 病毒气溶胶定性分析采样方法病毒气溶胶的定性分析，即病毒生物学特性分析。可选择冲击式采样、滤膜采样、离心式采样（液体介质）、静电吸附采样、撞击式采样等方法。选择撞击式采样时，应在琼脂表面涂抹一层薄的水溶性粘质层。４．３．３．２ 病毒气溶胶定量分析采样方法病毒气溶胶的定量分析，即病毒总数分析。可选择冲击式采样、滤膜采样、离心式采样（液体介质）、静电吸附采样、撞击式采样等方法。选择撞击式采样时，应在琼脂表面涂抹一层薄的水溶性粘质层。４．３．４ 毒素气溶胶采样方法４．３．４．１ 毒素气溶胶定性分析采样方法毒素气溶胶的定性分析，即毒素生物学特性分析。可选择冲击式采样、离心式采样（液体介质）、滤膜采样等方法。选择撞击式采样时，应在琼脂表面涂抹一层薄的水溶性粘质层。４．３．４．２ 毒素气溶胶定量分析采样方法毒素气溶胶的定量分析，即毒素质量分析。可选择冲击式采样、离心式采样（液体介质）、滤膜采样、撞击式采样等方法。选择撞击式采样时，应在琼脂表面涂抹一层薄的水溶性粘质层。４犌犅／犜３８５１７—２０２０４．４ 生物气溶胶采样器的选择４．４．１ 采样器的要求采样器应有明确的物理采样效率、生物采样效率，以及采集生物气溶胶的粒子空气动力学粒径范围，应说明采样介质类型及其对微生物存活的影响。４．４．２ 采样器类型４．４．２．１ 撞击式采样器通过喷嘴、喷口或裂隙的加速作用把生物气溶胶粒子采集到固体或半固体介质表面的采样器。通常分为筛孔式、狭缝式的撞击式采样器。测量生物气溶胶粒径分布宜选择六级撞击式采样器等。４．４．２．２ 冲击式采样器基于用气