WS∕T 686-2020 消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求

ICS11.080C50WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T686—2020消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求Analyticalmethodandevaluationrequirementsofantiviraldrugsindisinfectantandantibacterialandbacteriostaticagents2020-07-20发布2021-02-01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布WS/T686—2020I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准起草单位：北京市疾病预防控制中心、中国计量科学研究院、北京市理化分析测试中心、中国食品药品检定研究院、江苏省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心、山东省疾病预防控制中心。本标准主要起草人：丁晓静、王萍、杨奕、高运华、赵新颖、勾新磊、牛夏梦、李莉、李硕、李洁、赵珊、徐燕、李放、张流波、李炎、崔树玉、苏冠民。WS/T686—20201消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求1范围本标准规定了消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物的检测方法和评价要求。本标准适用于消毒剂与抗抑菌剂中更昔洛韦、阿昔洛韦、喷昔洛韦和利巴韦林及其它抗病毒药物的测定和评价。2规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。中华人民共和国药典3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1抗病毒药物antiviraldrugs用于预防和治疗病毒感染的药物。4更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦的检测方法4.1高效液相色谱法4.1.1原理以乙酸甲醇混合溶液超声提取试样中的更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦，提取液经离心、过滤，C18色谱柱分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。4.1.2试剂和材料除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1.2.1试剂4.1.2.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.1.2.1.2冰乙酸（CH3COOH）。4.1.2.1.3乙酸铵（CH3COONH4）。4.1.2.2试剂配制WS/T686—202024.1.2.2.1样品提取溶液：分别移取甲醇80mL和冰乙酸10mL，置于试剂瓶中，加入水10mL，混匀。4.1.2.2.2乙酸铵乙酸缓冲溶液：称取乙酸铵0.77g，置于试剂瓶中，加入水400mL溶解，再加入冰乙酸2mL，加水至500mL，混匀。4.1.2.3标准品更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦纯度均大于97%或经国家认证并授予证书的标准物质，其它相关信息参见附录A。4.1.2.4标准溶液配制4.1.2.4.1标准储备液：准确称取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦各25.0mg，分别置于50mL容量瓶中，加入样品提取溶液约40mL，超声10min，溶解，用样品提取溶液定容至刻度，配制成质量浓度均为500mg/L的标准储备液。冷藏保存，有效期为3个月。4.1.2.4.2混合标准中间液：分别移取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦标准储备液，用样品提取溶液稀释成质量浓度均为50mg/L的混合标准中间液。冷藏保存，有效期为1个月。4.1.2.4.3混合标准系列溶液：取不同体积的混合标准中间液，用样品提取溶液稀释成混合标准系列溶液，如0.5mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L。临用现配。4.1.2.5材料4.1.2.5.1有机系滤膜：孔径为0.45m。4.1.2.5.2玻璃珠：Φ＜5mm。4.1.3仪器和设备4.1.3.1高效液相色谱仪：带二极管阵列检测器或紫外检测器。4.1.3.2分析天平：最小分度值为0.1mg。4.1.3.3离心机：≥3000r/min。4.1.3.4涡旋混合器。4.1.3.5超声波清洗器。4.1.4分析步骤4.1.4.1样品前处理4.1.4.1.1液体剂型称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，涡旋混匀1min，超声10min，经滤膜过滤，备用。4.1.4.1.2其它剂型称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，加入1至2颗玻璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声10min，离心5min，取上清液经滤膜过滤，备用。4.1.4.2高效液相色谱参考条件高效液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：C18柱（柱长250mm，内径4.6mm，粒径5m），或相当者；WS/T686—20203b)流动相：A相为甲醇，B相为乙酸铵乙酸缓冲溶液；c)流速：1.0mL/min；d)柱温：30℃；e)进样体积：5L；f)检测波长：254nm；g）梯度洗脱程序：见附录B.1。4.1.4.3标准曲线的制作将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入高效液相色谱仪，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的质量浓度为横坐标，绘制峰面积—质量浓度（mg/L）标准曲线。更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦混合标准溶液的高效液相色谱图参见附录C.1。4.1.4.4测定将处理好的试样溶液注入高效液相色谱仪，根据标准曲线计算试样溶液中目标化合物的质量浓度。4.1.4.5结果计算和表述试样中目标化合物的含量按式（1）计算：)1.(..............................mVX式中：X——试样中目标化合物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；——标准曲线计算的试样溶液中目标化合物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V——定容体积，单位为毫升（mL）；m——称样量，单位为克（g）。结果保留三位有效数字。4.1.4.6精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。本方法回收率和精密度见附录D。4.1.4.7检出限和定量限当取样量为0.5g，定容体积为10mL，本方法的检出限和定量限：更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦的检出限均为2.0mg/kg；定量限均为7.0mg/kg。4.2胶束电动毛细管色谱法4.2.1原理以含有十二烷基硫酸钠的样品提取溶液提取试样中的更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦，用胶束电动毛细管色谱分离模式进行分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。4.2.2试剂和材料除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。WS/T686—202044.2.2.1试剂4.2.2.1.1十二烷基硫酸钠（SDS，C12H25SO4Na）。4.2.2.1.2硼砂（Na2B4O7·10H2O）。4.2.2.1.3无水磷酸二氢钠（NaH2PO4）。4.2.2.1.4氢氧化钠（NaOH）。4.2.2.2试剂配制4.2.2.2.1分离缓冲溶液：称取SDS2.019g、硼砂0.191g和无水磷酸二氢钠0.150g，置于同一具塞带刻度塑料离心管中，加水至50mL刻度，超声溶解、混匀，配制成含有140mmol/LSDS、10mmol/L硼砂和25mmol/L磷酸二氢钠的分离缓冲溶液。4.2.2.2.2样品提取溶液：将分离缓冲溶液用水稀释10倍，配制成样品提取溶液。4.2.2.2.3氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠2g，加入预先装有40mL水的塑料离心管中，振摇溶解，再加水至50mL刻度、混匀，配制成1mol/L氢氧化钠溶液。4.2.2.3标准品同4.1.2.3。4.2.2.4标准溶液配制4.2.2.4.1标准储备液：准确称取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦各10.0mg，分别置于10mL容量瓶中，加入样品提取溶液约5mL，振摇（或超声）溶解，用样品提取溶液定容至刻度，配制成质量浓度均为1000mg/L的标准储备液。临用现配。4.2.2.4.2混合标准中间液：分别移取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦标准储备液，用样品提取溶液稀释成质量浓度均为100mg/L的混合标准中间液。临用现配。4.2.2.4.3混合标准系列溶液：取不同体积的混合标准中间液，用样品提取溶液稀释成混合标准系列溶液，如1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、40.0mg/L。临用现配。4.2.2.5材料同4.1.2.5。4.2.3仪器和设备4.2.3.1毛细管电泳仪：带二极管阵列检测器或紫外检测器。4.2.3.2未涂层熔融石英毛细管：内径50m，外径375m。4.2.3.3同4.1.3.2。4.2.3.4同4.1.3.4。4.2.3.5同4.1.3.5。4.2.4分析步骤4.2.4.1样品预处理4.2.4.1.1液体剂型称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，涡旋混匀1min，超声10min，备用。WS/T686—202054.2.4.1.2其它剂型称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，加入1至2颗玻璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声10min，备用。4.2.4.2毛细管电泳参考条件毛细管电泳参考条件如下：a)分离柱：未涂层熔融石英毛细管，302mm（有效长度为200mm）；b)电压：10kV；c)进样压力：3.448kPa；d)进样时间：4s（进样体积约7.9nL）；e)检测波长：254nm；f)清洗程序：新装毛细管在使用前分别用NaOH溶液冲洗20min，水冲洗5min，分离缓冲溶液冲洗5min。每次进样前依次用NaOH溶液冲洗1.5min，水冲洗1.5min，分离缓冲溶液冲洗1.5min。4.2.4.3标准曲线的制作将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入毛细管电泳仪，以色谱峰的校正峰面积（峰面积除以迁移时间）为纵坐标，与其对应的质量浓度为横坐标，绘制校正峰面积—质量浓度（mg/L）标准曲线。更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦混合标准溶液的毛细管电泳图参见附录E.1。4.2.4.4测定将处理好的试样溶液注入毛细管电泳仪，根据标准曲线计算试样溶液中目标化合物的质量浓度。4.2.4.5结果计算和表述试样中目标化合物的含量按式（1）计算。结果保留三位有效数字。4.2.4.6精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。4.2.4.7检出限和定量限当取样量为0.5g，定容体积为10mL，本方法的检出限和定量限：更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦的检出限均为4.0mg/kg；定量限均为14.0mg/kg。4.3超高效液相色谱-串联质谱确证方法4.3.1原理以乙酸甲醇混合溶液超声提取试样中的更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦，经离心、过滤，用超高效液相色谱-串联质谱仪进行确证。4.3.2试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。WS/T686—202064.3.2.1试剂4.3.2.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.3.2.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.3.2.1.3冰乙酸（CH3COOH）。4.3.2.2试剂配制4.3.2.2.1同4.1.2.2.1。4.3.2.2.20.1%甲酸甲醇溶液：100mL甲醇中加入0.1mL甲酸，混匀。4.3.2.2.30.1%甲酸水溶液：100mL水中加入0.1mL甲酸，混匀。4.3.2.3标准品同4.1.2.3。4.3.2.4标准溶液配制4.3.2.4.1同4.1.2.4.1。4.3.2.4.2混合标准中间液：分别移取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦标准储备液，用水释成质量浓度均为5mg/L的混合标准中间液。冷藏保存，有效期为1个月。4.3.2.4.3混合标准应用液：将混合标准中间液用水稀释100倍，配成质量浓度均为50g/L的混合标准应用液。临用现配。4.3.2.5材料4.3.2.5.1有机系滤膜：孔径为0.22m。4.3.2.5.2同4.1.2.5.2。4.3.3仪器和设备4.3.3.1超高效液相色谱-串联质谱仪：带电喷雾离子源。