AgilentHPLC1100工作站高级操作培训

HPLC1100ChemStation高级操作培训授课教师纪学海2019年9月15日Update:2005-3-21Slide2HPLC1100Advance操作培训日程安排第一天上午：1课程简介及相互介绍2化学工作站各个工作界面介绍3完整方法的编辑、修改、存储及运行4HPLC1100仪器配置及参数设置下午：1数据分析参数设置2色谱图的优化处理3积分事件及手动积分的选择和应用4高级校正表的编辑和设置第二天上午：1报告格式的选择及设定2光谱的提取、光谱库的建立及检索3色谱峰纯度检测4色谱条件的优化及色谱图的提取下午：1序列参数的设置以及统计功能的使用2批处理功能的设置及应用Update:2005-3-21Slide3第三天上午：1个性化报告的设定与编辑2工作站故障诊断功能的应用3结业考试结业午餐下午：1化学工作站的重新安装、配置及启动(选修)2发结业证3自由练习、讨论Update:2005-3-21Slide4第一章化学工作站各个工作界面介绍Update:2005-3-21Slide5化学工作站各个工作界面的切换切换工作界面Update:2005-3-21Slide6化学工作站Views菜单Fullmenu/shortmenu切换显示当前日记本，察看错误信息等内容Update:2005-3-21Slide7化学工作站的ChangeAccessLevel功能如果要使用密码保护化学工作站，请选中此选项。Update:2005-3-21Slide8化学工作站Scheduler的使用使用时要注意保存，否则工作站不予以执行。Update:2005-3-21Slide9化学工作站Scheduler的使用Result栏中可以显示化学工作站执行Command的结果Update:2005-3-21Slide10选择在线信号从View菜单,选择OnlineSignals,单击Change，在EditSignalPlot窗口中选择要监控的信号。Update:2005-3-21Slide11在线信号显示Update:2005-3-21Slide12查看Logbook从View菜单选择Logbook，单击CurrentLogbook显示当前Logbook内容。Update:2005-3-21Slide13•方法的概念：方法是一个参数集，它包括分析一个样品所需要的所有参数。•方法文件名：xxx.m。•方法的组成：方法信息(Methodinformation)仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition)数据分析参数(DataAnalysis)运行时间表(RunTimeChecklist)第二章方法编辑、保存Update:2005-3-21Slide14使用EditEntireMethod编辑一个完整的方法编辑一个完整的方法单击图标，也可以开始编辑一个完整的方法。Update:2005-3-21Slide15选择所要编辑的内容Update:2005-3-21Slide16方法信息(MethodInformation)Update:2005-3-21Slide17包括：流量(Flow)，流动相组成(Solvents)，停止采集时间(StopTime)，后运行时间(PostTime)，梯度编程(Timetable)，压力限制设定(PressureLimits)等泵的操作参数Update:2005-3-21Slide18标准自动进样器参数Update:2005-3-21Slide19标准进样过程原理示意图Meteringdevice6-portvalveSamplingunitFrompumpTocolumnTowaste准备位置抓取样品瓶吸取样品进样和运行位置Update:2005-3-21Slide20标准自动进样器的程序进样Update:2005-3-21Slide21Wellplate自动进样器参数Update:2005-3-21Slide22控温范围：低于室温10℃～80℃两个单独的加热区安装切换阀可以进行柱切换可以容纳30cm长色谱柱安装柱识别可以自动记录进样次数柱温箱参数设置Update:2005-3-21Slide23可以选择存储5个信号信号波长范围191-949nm可变狭缝：1,2,4,8,16nm可以时间编程可以保存数张或所有光谱DAD检测器参数设置Update:2005-3-21Slide24DAD参数优化StepandSlit:Agilent1100DAD狭缝宽度可以程序变化，变化步径1，2，4，8，16nm。如果样品浓度较高，而需要精细的光谱结构，建议使用1或2nm的狭缝宽度。如果样品浓度较稀，建议使用8或16nm宽度狭缝。采集样品的谱带宽度至少要与狭缝宽度一样。PeakWidth:增加响应时间（峰宽）可以增加组成色谱信号中每个数据点的采集次数。因为检测器的噪音与采集次数平方根成反比，所以增加响应时间可以降低噪音。但增加响应时间（峰宽）会降低定量分析的重复性。一般对于精确的定量分析，一个色谱峰要求采集20个数据点。设置峰宽的经验：设置峰宽等于实际色谱峰的最窄峰宽。Update:2005-3-21Slide25SampleSignalandReferenceSignal:设置样品吸收波长与参比波长遵从下列规则：•样品吸收波长选择在样品的最大吸收波长，而且在此吸收波长下没有流动相吸收的干扰。•选择样品信号的谱带宽度应覆盖样品吸收谱带的半峰宽（假设样品吸收谱带为高斯峰）。•参比吸收谱带应选择在尽量靠近样品吸收谱带，而且在此区域没有或尽量低的吸收强度。•参比峰谱带宽度要大于或等于样品谱带宽度。注意：增加样品谱带宽度，会降低样品的吸收强度，但会降低噪音。选择合适的参比吸收波长可以减小梯度洗脱过程中的基线漂移。PeakSupression（峰抑制）:DAD检测器一个非常有趣的功能是进行峰抑制。例如有两个样品没有分开，共同洗脱出来，可以设置某一个样品的等吸收波长为参比波长，则被设为参比峰的样品被抑制，而另一个样品峰被分离。不过，此样品峰的吸收强度要损失10％～30％。Update:2005-3-21Slide26VWD检测器参数设置Update:2005-3-21Slide27选择在方法中要执行的项目可以选择保存GLP数据可以将方法和数据保存在一起运行时间表(RunTimeChecklist)Update:2005-3-21Slide28从Method菜单选择SaveMethod/SaveMethodas或从存贮方法工具图标存贮方法。存储方法单击本图标可以保存方法，务必注意不要发生方法覆盖、丢失Update:2005-3-21Slide29要分析单个样品，先从RunControl菜单选择SampleInfo...,输入样品信息。样品信息包括：操作者姓名(OperatorName)，存盘数据文件(DataFile)，样品参数(SampleParameters)样品评述(comment)。然后运行方法(RunMethod)。运行方法Update:2005-3-21Slide30用户图形友好界面(GUI)鼠标左键单击任一模块图标均可弹出快捷菜单使用鼠标左键单击各个模块右下角图标均可对该模块进行控制：开、关或实现基线调零等功能。所有模块同时开、关控制Update:2005-3-21Slide31用户图形友好界面——各个模块的控制Update:2005-3-21Slide32用户图形界面——溶剂瓶的填充量Update:2005-3-21Slide33用户图形友好界面——各种参数的显示点击下拉菜单，可以分别显示各种所需的参数：LC采集参数、数据分析参数等，且便于用户改动。Update:2005-3-21Slide34Instrument菜单简介设置各个模块的参数开启、关闭整个系统查看仪器Firmware及序列号查看、输入色谱柱信息使用了Wellplate自动进样器才出现该菜单对化学工作站进行仪器配置Update:2005-3-21Slide35选择InstrumentMorePumpAuxiliary…菜单，即可弹出下图窗口。泵的辅助功能在该窗口可以设置泵的最大升流速率、泵冲程大小以及设置溶剂的压缩补偿因子。Update:2005-3-21Slide36自动进样器的扩展功能Update:2005-3-21Slide37色谱柱信息的输入Update:2005-3-21Slide38VWD停泵扫描采集光谱使用VWD停泵扫描的功能，可以采集样品的吸收光谱，主要操作步骤如下：1.在Online工作站界面的View菜单下打开VWDScans窗口；2.按照正常的进样方式采集样品色谱数据，并保证能够在OnlineSignal窗口中观测到色谱信号；3.进样后，色谱图上出现基线时，扫描空白吸收光谱在Instrument菜单下，选择MoreVWD中的BlankScan4.色谱图上出现色谱峰时，扫描样品吸收光谱在Instrument菜单下，选择MoreVWD中的SampleScan此时得到的是自动扣除空白吸收后的样品吸收光谱。Update:2005-3-21Slide39可变波长检测器VWD的停泵扫描功能进样之前选择VWDScans菜单，打开VWD光谱扫描窗口Update:2005-3-21Slide40可变波长检测器VWD的停泵扫描功能进样后，流动相流经流通池，给出色谱基线信号时，点击MoreVWD菜单中的BlankScan，扫描空白流动相的吸收光谱，如下图所示。Update:2005-3-21Slide41可变波长检测器VWD的停泵扫描功能扫描所得的流动相吸收光谱Update:2005-3-21Slide42可变波长检测器VWD的停泵扫描功能出现色谱峰时，点击SampleScan，扫描样品峰的吸收光谱Update:2005-3-21Slide43可变波长检测器VWD的停泵扫描功能光谱窗口中给出扣除流动相吸收光谱后的样品峰吸收光谱Update:2005-3-21Slide44第三章谱图优化本章内容：•谱图调用•空白谱图的扣除•谱图优化•谱图加标注•谱图比较、处理Update:2005-3-21Slide45调用数据文件在DataAnalysis界面，File菜单下选择LoadSignal。扣除空白谱图Update:2005-3-21Slide46扣除空白谱图选择需要扣除的空白运行色谱文件Update:2005-3-21Slide47选择、规定一个方法中要进行调用、处理的信号SignalDetailsUpdate:2005-3-21Slide48使用SignalOptions...功能来优化色谱图的显示谱图优化在DataAnalysis界面下，Graphics菜单下选择SignalOptions...Update:2005-3-21Slide49谱图优化工具谱图优化图标谱图显示方式化合物名称保留时间显示标题显示轴单独/重叠显示基线打印窗口色谱图控制图标移动标注文字标注设置标注格式线形标注删除标注WMF图标注拷贝Update:2005-3-21Slide50选择:字体和字型字体大小字体颜色、旋转角度等在色谱图上加标注Update:2005-3-21Slide51AddAnnotationDrawLineinWindowMoveAnnotationDeleteAnnotation谱图处理工具谱图处理工具Update:2005-3-21Slide52•如何执行积分•自动积分•如何建立积分事件表•如何使用积分事件表•手动积分本章内容：第四章积分优化Update:2005-3-21Slide53增强积分方式可以提供:•当基线波动时，基线的定位。•使用初始峰高参数去除噪音峰。•控制积分开始和结束的标识。•在噪音中定位信号峰。•使用二阶导数确定肩峰。增强积分方式Update:2005-3-21Slide54当调用信号时，可以通过Integrateafterload选项自动积分。您也可以通过以下方式进行积分:•从Int