API5000training液质培训教材

API5000OperatorTrainingAPI5000操作培训API5000OperatorTrainingAPI5000OperatorTraining什么是液质联用(LC/MS)•LC:液湘色谱仪•MS:MassSpectrometer一种能够生成离子,在气态中根据质荷比的不同把它们分离并进行检测的仪器.API5000OperatorTrainingAveragemassofallnaturalisotopesCarbonAbundanceIntegerMass12C=12.0000Da98.91%1213C=13.00341.09%13(12.0000)(0.9891)+(13.0034)(.011)=12.011ElementMassAPI5000OperatorTrainingSignal(质荷比)=(MW(分子量)+N)/N(N=电荷数)API5000OperatorTraining用液相或注射泵将样品注入质谱.1.样品注入样品在离子源内电离,带电离子在接口内进行去溶剂,聚集,冷却进入质量分析器2.离子化四极杆用于传输离子或选择母离子和子离子,.离子通过聚焦和传输进入下一组四极杆3.质量分析器—四极杆检测器记录离子的信号.然后将信号传输到电脑绘制成色谱图.4.离子检测和数据分析Q0Q1Q3DFCEMORSKEXITQ2(LINAC)系统组成5.真空系统API5000OperatorTraining样品注入方式•连续注射•样品放在注射器中或静态的针内•用注射泵或电场引力,样品流连续并恒定地流入离子源喷口•通常用于安装时调谐,质量校正和标准样品质谱方法的优化•流动注射分析•用手动进样器和液相泵,注入样品,由流动相带入离子源喷口•通常安装5ul的定量环•液质联用•用液相的泵,流速从nL/min到mL/min•样品可能是纯品或者是混合物•流动相带着样品经过色谱柱分离后进入质谱的离子源API5000OperatorTrainingTurboVtm离子源(API3200,API4000,和API5000)辅助气加热头TISorAPCI喷雾针液体进入口垂直精密调节旋钮水平精密调节旋钮两通或三通离子源排气口喷雾针出口APCI电晕针API5000OperatorTrainingTurboVTM离子源API5000OperatorTrainingTurboVProbes在使用时调节喷雾针出套管1-3mmAPI5000OperatorTraining电喷雾(EI)-IonSpraytm从进样口进来的样品液体被雾化气吹成雾滴,加于喷嘴上的高压电使雾滴带电,带电雾滴去溶剂后生成样品离子API5000OperatorTraining电喷雾-TurboIonSprayCurtainGas(CUR)EvaporationCoulombExplosionIonSprayVoltage(IS)NebulizingGas(GS1)LCFlowFormationofChargedDropletsOrifice(DP)MassAnalyzerVacuumAtmosphericPressureTurboHeater(TEM)/HeatedGas(GS2)TIS工作原理同EI,不同的是TIS有辅助加热气(GS2),可加大去溶剂的速度可用于比较大的液体流量API5000OperatorTrainingReactionwithanalytemoleculesCoronaDischargeNeedle(NC)IonizationofsolventmoleculesOrifice(DP)MassAnalyzerX=SolventMoleculeM=AnalyteCurtainGas(CUR)VacuumAtmosphericPressureLCFlowFormationofclustersHeatedNebulizer(TEM)NebulizingGas(GS1)APCI三步离子化的过程:1.电晕针放电使离子源内的N2或O2带电2.N2或O2转移电荷到气态溶剂分子上3.带电的气态溶剂分子转移电荷到气态样品上大气压化学电离源(APCI)aka:HeatedNebulizerAPI5000OperatorTrainingTurboVTM离子源的APCI•API3200,4000,和5000的离子源体是TIS和APCI共用的,TIS和APCI的互换不用工具,只用手就可以完成.•放电针位置调节钮,单手操作即可•放电针一直在离子源体内API5000OperatorTrainingPressuresduetoDifferentialPumping气帘气档板与小孔板有机械泵抽真空Q1region10µTorrQ0,EntrancePotential(EP)入口电位6-8mTorrAtmosphericPressure大气压Curtainplate气帘气档板OrificeHole小孔Curtaingas气帘气Skimmer(Grounded)接地Orificeplate,小孔板DeclusteringPotential(DP)去簇电压API3200/API4000仪器的接口API5000OperatorTrainingInterfaceAPI5000OperatorTrainingOrificeQjetOrifice和QJetAPI5000OperatorTraining四极杆的示意图不稳定的离子稳定的离子离子源检测器直流和交流控制电信号API5000OperatorTrainingAPI5000OperatorTraining四极杆的原理•在四极杆上有三种电压–RF–固定频率的交流电(1MHzonAPI2000;816KHzonAPI5000;1.2288MHzonAPI5000)–FilteringDC(FDC)–在每组杆之间的电压差.•用于选择离子•决定分辨率.–RodOffsetVoltage(ROV)–低的直流电定义了离子轴向飞行的动力.•“RFOnly”的意义:–没有FDC;只有RF,&RodOffset–只是传输离子,没有分辨率API5000OperatorTraining180°phaseshift电信号180度相移=ions离子簇1.离子簇被吸引到“B”极.2.RF电压极性反转,所有的离子簇被吸引到‘A’极.3.RF电压极性反转,所有的离子簇被吸引到‘B’极.4.RF电压极性反转,所有的离子簇被吸引到‘A’极..BABARFRFRFRF180°phaseshift电信号180度相移180°phaseshift电信号180度相移EndView后视图BABA四极杆原理之RFABBARFonly-Arods&Brodsare180outofphase只加交流信号---A杆与B杆信号强度相同,相位差180度Q0,Q2&StubbiesalwaysRFonly.Q3RFonlyifselectinginQ1.Q1RFonlyifselectinginQ3API5000OperatorTrainingABBAToDetector去检测器AABB离子簇在离子通道的运动模式A极和B极上的RF交流电压及ROV直流偏置电压使离子簇以螺旋运动的方式前进RFonly-Arods&Brodsare180outofphase只加交流信号---A杆与B杆信号强度相同,相位差180度API5000OperatorTraining四极杆原理之FDCAPI5000OperatorTraining四极杆原理之ROV(IE)•离子能量(IE)–影响分辨率和峰形•降低IE=分辨率变好,灵敏度降低•提高IE=分辨率变差,灵敏度提高•Q1离子能量=n(Q0-RO1);n—电荷数–Q1IE1=Q0-RO1=0.5-2eV•Q3离子能量=n(RO2-RO3);n—电荷数–Q3IE3=RO2-RO3=(1-6eV)API5000OperatorTrainingQ1的离子能量(IE1)•IE=0.5V•分辨率好而灵敏度差•IE=2.0V•分辨率差而灵敏度好.API5000OperatorTraining分辨率的定义•FWHH:半峰高处的峰宽–APIResolutionSpecification•Unit=0.7(±0.1amuFWHH)•High=0.5(±0.1amuFWHH)•Low=~1.1(±0.1amuFWHH)•Open=3-5amu–在调节完分辨率后需要做质量校正API5000OperatorTraining四极杆原理之灵敏度和分辨率•灵敏度和分辨率是相互影响,相互制约的.•分辨率差则灵敏度高•分辨率好则灵敏度低LowResolution(»1.5-2amuFWHH)UnitResolution(=0.7amuFWHH)HighResolution(=0.5amuFWHH)API5000OperatorTraining离子检测器(ChannelElectronMultiplier)API5000OperatorTraining检测器电压的调节如果检测器电压增加100V,信号至少增加20~30%.则需要增加检测器电压API5000OperatorTrainingAPI5000的扫描方式API5000OperatorTrainingQ1&Q3扫描模式•Q1全扫描(Q1MS):–Q1作为单极质量分析器–Q1scan主要用于确定母离子–单个质量扫描范围•Q1多离子监测MultipleIon(Q1MI)–集中在感兴趣离子附近的小范围–用于定量•在两种Q1scans模式下,Q3处于RF-only模式–Q3传输所有的离子到检测器•对于Q3scan模式-用Q3替代Q1–对于Q3scans，Q2是离子源.用少量的CAD气作碰撞聚焦–Q3fullscan用于校准Q3API5000OperatorTrainingQ1ScanQ3ScanQ1Q2Q39235321221300150092353212213001500Q1和Q3ScanStart/StopModeAPI5000OperatorTrainingQ1Q2Q3Q1ScanQ3ScanQ1和Q3MSScansMultipleIonModeAPI5000OperatorTrainingMS/MS扫描方式•MS/MS的扫描方式–ProductIon产物离子扫描•提供母离子的碎片离子信息–PrecursorIon•提供了产生特定子离子的母离子的信息–NeutralLoss•提供了产生特定中性丢失碎片的母离子的信息–MRM(MultipleReactionMonitoring)•用于定量.具有高灵敏度和高选择性•在所有的MS/MS模式中,Q3处于质量过滤器模式–Q3能够扫描，或者固定在某一质量数–Q2产生进入Q3的离子API5000OperatorTrainingMS/MS–ProductIonScanCADgas923Q1Q2Q3PrecursorselectedinQ1PrecursorFragmentsinQ2ProductIonsScannedinQ3923/226923/497923/5022001200502497226API5000OperatorTrainingMS/MS–PrecursorIonScan1289923609532PrecursorscannedinQ1PrecursorFragmentsinQ2ProductIonselectedinQ31289/6092001500Q1Q2Q3API5000OperatorTrainingMS/MS–MRM(MultipleReactionMonitoring)765335923532Q1Q2Q3PrecursorselectedinQ1PrecursorFragmentedinQ2ProductIonFocusedinQ3923/765532/335API5000OperatorTrainingAPI5000OperatorTrainingAnyQuestions??