SWT 6-2015 植物提取物 虾青素油

SW国际商务标准SW/T6—2015植物提取物虾青素油AstaxanthinEsters2015-12-1实施2015-11-20发布中国医药保健品进出口商会发布SW/T6—20152前言本标准由中国医药保健品进出口商会提出。本标准由中华人民共和国商务部归口。本标准由中国医药保健品进出口商会国际商务标准化技术委员会负责解释。本标准由北京绿色金可生物技术股份有限公司负责起草。本标准主要起草人：姚军芳、李艳梅、张培楠、侯翔燕、吴启林、李春华SW/T××××—××××3国际商务标准植物提取物虾青素油1范围本标准规定了虾青素油的技术要求、检验方法和标签、包装、运输、贮存要求。本标准适用于以人工培养的红球藻属雨生红球藻（Haematococcuspluvialis）为原料经提取精制后，得到的虾青素油。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数GB4789.38食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数GB9685食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准中华人民共和国药典（2010年版）一部附录IXE重金属检查法中华人民共和国药典（2010年版）一部附录IXB铅、镉、砷、汞、铜测定法3有效成分名称、结构式、分子式和相对分子质量虾青素油（AstaxanthinEsters）中含有的有效成分是虾青素脂肪酸酯，即（3S，3’S）-3,3’-二羟基-β,β-胡萝卜素-4,4’-二酮的脂肪酸酯。（3S，3’S）-3,3’-二羟基-β,β-胡萝卜素-4,4’-二酮的结构式如下图所示，其分子式为C40H52O4，分子量为596.84。图1（3S，3’S）-3,3’-二羟基-β,β-胡萝卜素-4,4’-二酮结构式虾青素油主要由3S,3’S虾青素立体异构体以单酯、二酯和游离形式组成。游离虾青素是3和3’羟基位没有脂肪酸结合，虾青素单酯有一个脂肪酸结合到3或3’羟基的位置，虾青素二酯是3和3’羟基的位置各有一个脂肪酸结合。4技术要求SW/T6—201544.1工艺要求4.1.1植物原料雨生红球藻（Haematococcuspluvialis）为人工养殖，在培养成熟后，收获而得到。4.1.2工艺过程雨生红球藻超临界二氧化碳萃取或溶剂提取纯化产品4.2产品要求4.2.1感官要求：应符合表1的要求。表1感官要求项目要求检验方法色泽深红色取适量样品置于清洁、干燥的比色管中，在自然光线下，观察其色泽和状态，并嗅其气味。气味藻类特殊气味状态油状物4.2.2理化要求:应符合表2规定。表2理化要求项目指标检验方法鉴别符合规定附录A中A.2虾青素含量，%≥5.0附录A中A.2游离虾青素含量(面积归一化法)，%≤5.0附录A中A.3水分，%≤0.5附录A中A.4重金属（以Pb计），mg/kg≤10中华人民共和国药典2010版一部附录ⅨE铅（Pb），mg/kg≤1.0中华人民共和国药典2010版一部附录IXB镉（Cd），mg/kg≤1.0中华人民共和国药典2010版一部附录IXB砷（As），mg/kg≤2.0中华人民共和国药典2010版一部附录IXB汞（Hg），mg/kg≤1.0中华人民共和国药典2010版一部附录IXB4.2.3微生物指标要求:应符合表3规定。表3微生物指标项目指标检验方法细菌总数，cfu/g＜1000GB4789.2霉菌及酵母菌数，cfu/g＜100GB4789.15大肠埃希氏菌不得检出GB4789.38沙门氏菌不得检出GB4789.4SW/T××××—××××54.2.4其他污染物其他污染物限量要求，依据不同用途，应符合我国相关法规的规定。对于出口产品，应符合出口目的国相关法规的规定。5.检验方法5.1感官检验按表1中规定进行检验。启开试样后，立即嗅其气味；另取试样适量置于无色50mL比色管中，在自然光线下，观察其色泽、外观，并检查有无异物。5.2理化检验5.2.1鉴别鉴别按附录A.2中规定的检验方法进行测定，所得的供试品谱图中的三个主要的峰分别与对照品谱图中的13-顺式虾青素，全反式虾青素和9-顺式虾青素的保留时间一致。5.2.2虾青素含量按附录A.2中规定的检验方法进行测定。5.2.3游离虾青素含量按附录A.3中规定的检验方法进行测定。5.2.4水分按附录A.4中规定的检测方法进行测定。5.2.5重金属（以Pb计）按中华人民共和国药典（2010年版）一部附录IXE重金属检查法进行测定。5.2.6铅按中华人民共和国药典2010版一部附录IXB铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.2.7镉按中华人民共和国药典2010版一部附录IXB铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.2.8砷按中华人民共和国药典2010版一部附录IXB铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.2.9汞按中华人民共和国药典2010版一部附录IXB铅、镉、砷、汞、铜测定法进行测定。5.3微生物检验5.3.1细菌总数按GB4789.2进行测定。5.3.2霉菌及酵母菌数按GB4789.15进行测定5.3.3大肠埃希氏菌按GB4789.38进行测定。5.3.5沙门氏菌按GB4789.4进行测定。6包装、标签、运输、贮存6.1包装包装材料应符合GB9685食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准的要求。6.2标签包装标签上应标注：产品名称、产品批号、产品规格、净含量、生产日期、保质期、生产厂名、SW/T6—20156厂址、产地。标签内容清晰可见，标签应粘贴牢固。6.3运输运输时必须轻装轻卸，不得与有毒、有害和易污染物品混装载运，严防雨淋、暴晒。6.4贮存产品应存放在干燥、通风、清洁的地方，堆码距墙壁和地面20cm以上、并有垫隔物。避免与有毒、有害、易腐、易污染等物品一起堆放。6.5保质期在符合规定的贮运条件和包装完整、未经开启封口的情况下，保质期为两年。SW/T××××—××××7附录A（规范性附录）检验方法A.1一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水。实验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2虾青素含量检测A.2.1方法提要虾青素油主要含有虾青素单酯、虾青素二酯和游离虾青素。虾青素酯经胆固醇酯酶酶解后，都转化成游离虾青素。虾青素含量以游离虾青素计。A.2.2仪器和用具A.2.2.1分析天平，感量为0.01mg。A.2.2.2超声波清洗仪。A.2.2.3高效液相色谱仪（附紫外检测器）。A.2.2.40.45μm微孔滤膜，有机相。A.2.2.5棕色容量瓶，100mLA.2.2.6离心机A.2.2.7涡旋混合器A.2.2.8恒温箱A.2.2.9氮吹仪A.2.3试剂和溶液A.2.3.1甲醇，色谱纯。A.2.3.2叔丁基甲醚，色谱纯。A.2.3.3磷酸，优级纯。A.2.3.4三羟甲基氨基甲烷。A.2.3.5石油醚（60-90℃）。A.2.3.6丙酮。A.2.3.7纯水，GB/T6682规定的二级水A.2.3.8十水硫酸钠A.2.3.9无水硫酸钠A.2.3.10盐酸A.2.3.11内标：反式-β-阿朴-8'-胡萝卜醛（Trans-beta-apo-8'-carotenal），Sigma货号10829或其他等同品。A.2.3.12对照品：USPAstaxanthinEstersfromHaematococcuspluvialisRS（注：该对照品是雨生红球藻来源的虾青素酯混合物，含有13-顺式虾青素、全反式虾青素和9-顺式虾青素的脂肪酸酯，标示的总虾青素含量以酶解后游离虾青素计约10%）。A.2.3.13胆固醇酯酶（Cholesterolesterase），WakoPureChemicals货号037-11221，Sigma货号C9281或其他等同品。SW/T6—20158A.2.3.140.05mol/LTris-HCl（PH7.0）缓冲液的配制：精确称取三羟甲基氨基甲烷0.606g，用75mL去离子水溶解,用1mol/L盐酸调pH7.0，用水稀释至100mL。A.2.3.15胆固醇酯酶溶液的配制：精确称取胆固醇酯酶适量到25mL容量瓶中，用0.05mol/LTris-HCL（PH7.0）缓冲液溶解，配成浓度为4个酶活单位/mL的酶溶液，现用现配。A.2.4色谱条件及系统适用性A.2.4.1色谱条件a)色谱柱：YMCTMCarotenoidS-5，4.6mm×250mm或同类型色谱柱。b)流动相：流动相：A相：甲醇；B相：甲基叔丁基醚；C相：1%磷酸水梯度条件见表A1。表A1梯度条件时间（min）甲醇（%）甲基叔丁基醚（%）1%磷酸水（%）08115415663042316804271680427.1811543581154c)检测波长：474nm。d)柱温：25℃e)流速：1.0mL/minf)进样量：20μLA.2.4.2系统适用性系统适用性溶液为对照品溶液。对照品溶液的色谱图与使用的对照品所附的参考谱图相似；13-顺式虾青素与全反式虾青素的分离度不小于2.0。A.2.5操作方法A.2.5.1内标溶液的制备：精确称取约9mg内标到10mL小烧杯，用丙酮溶解并转移到50mL容量瓶中，丙酮定容，摇匀，即得。A.2.5.2对照品储备溶液的制备：精密称取对照品约30mg（精确至0.01mg），到10mL干燥小烧杯中，用丙酮溶解并转移到100mL容量瓶中，丙酮定容，摇匀。A.2.5.3对照品溶液的制备：精确吸取2.0mL对照品储备液和1.0mL内标溶液到10mL玻璃具塞离心管中，再加入3.0mL胆固醇酯酶溶液到离心管中，倒置混合均匀。将离心管置于37℃的恒温箱中反应45分钟，每10分钟轻轻地缓慢地倒置混合一次。反应后，往管中加入1g十水硫酸钠，2mL石油醚，涡旋混合30秒，然后置于离心机中在3000rpm下离心3min。新取一只10mL玻璃离心管，加入1g无水硫酸钠，然后用滴管吸取石油醚层，移入新的管中，注意不要吸取中间的乳化层。在室温条件下，用氮气吹干石油醚，加入3mL丙酮，超声溶解，过滤，过滤的溶液即为对照品溶液。A.2.5.4供试品储备溶液的制备：将供试品置于50-60℃水浴中避光保温30分钟，每隔10分钟摇一次。精密称取供试品约60mg（精确至0.01mg），到10mL干燥小烧杯中，丙酮溶解并转移到100mL容量瓶中，丙酮定容，摇匀。可根据供试品的含量适当调节称样量，如供试品含量为10%，则称样量为30mg。SW/T××××—××××9A.2.5.5供试品溶液的制备：精确吸取2.0mL供试品储备液和1.0mL内标溶液到10mL玻璃具塞离心管中，再加入3.0mL胆固醇酯酶溶液到离心管中，倒置混合均匀。将离心管置于37℃的恒温箱中反应45分钟，每10分钟轻轻地缓慢地倒置混合一次。反应后，往管中加入1g十水硫酸钠，2mL石油醚，涡旋混合30秒，然后置于离心机中在3000rpm下离心3min。新取一只10mL玻璃离心管，加入1g无水硫酸钠，然后用滴管吸取石油醚层，移入新的管中，注意不要吸取中间的乳化层。在室温条件下，用氮气吹干石油醚，加入3mL丙酮，超声溶解，过滤，过滤的溶液即为供试品溶液。A.2.5.6测定方法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液20μL，依次注入高效液相色谱仪，测定，计算含量。A.2.6结果计算虾青素油中虾青素含量以游离虾青素的质量分数1w计，数值以%表示，按公式（A.1）计算：100%.).(/]cis-9A1.1trans-allAcis-13[.).(/]cis-9A1.1trans-allA)13([222221111111mSIA1.3APmSIAcis1.3Aw）（）（）（）（