FACSCantoII中文培训手册

BDFACSCantoIITM中文培训手册FACSCantoII中文中文中文中文培训手册培训手册培训手册培训手册2目目目目录录录录FACSCaFACSCaFACSCaFACSCantontontonto(II)培训所需设备培训所需设备培训所需设备培训所需设备////试剂试剂试剂试剂………………………………………………………………………………………………………………………………3333FACSCanto(II)开机程序开机程序开机程序开机程序………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………4FACSCanto(II)关机程序关机程序关机程序关机程序………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………6BDFACSCantoBDFACSCantoBDFACSCantoBDFACSCanto临床软件进行仪器日常质控临床软件进行仪器日常质控临床软件进行仪器日常质控临床软件进行仪器日常质控（（（（QCQCQCQC））））…………………………………………7777HLAHLAHLAHLA----B27B27B27B27校准校准校准校准……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………9999FACSCantoClinical六色免洗淋巴细胞亚群检测六色免洗淋巴细胞亚群检测六色免洗淋巴细胞亚群检测六色免洗淋巴细胞亚群检测…………………………………………10FACSCantoClinical软件的获取分析的具体操作软件的获取分析的具体操作软件的获取分析的具体操作软件的获取分析的具体操作…………………………………………11111111FACSCantoClinical软件进行软件进行软件进行软件进行HLA-B27分析分析分析分析……………………………………………………14Diva软件进行软件进行软件进行软件进行HLA-B27手动获取和分析手动获取和分析手动获取和分析手动获取和分析………………………………………………………………………………………………18Calibrite四色小球模拟细胞四色小球模拟细胞四色小球模拟细胞四色小球模拟细胞演示四色实验演示四色实验演示四色实验演示四色实验样本获取和分析样本获取和分析样本获取和分析样本获取和分析………………………………………………………………………………………………………………………………20Diva软件进行单色软件进行单色软件进行单色软件进行单色&双色获取和分析双色获取和分析双色获取和分析双色获取和分析………………………………………………………………………………………………23CytometerSetupandTracking（（（（CS&T））））操作流程操作流程操作流程操作流程………………………………24FACSCanto(II)流式细胞仪流式细胞仪流式细胞仪流式细胞仪HTS操作规程操作规程操作规程操作规程……………………………………………………………………………………31FACSCanto(II)日常保养和维护日常保养和维护日常保养和维护日常保养和维护…………………………………………………………………………………………………………………………………………33FACSCantoII中文中文中文中文培训手册培训手册培训手册培训手册3FACSCaFACSCaFACSCaFACSCantontontonto(II)培训所需设备培训所需设备培训所需设备培训所需设备////试剂试剂试剂试剂1.普通低速离心机（实验要求为300g,相当于1000～1500rpm，可调转速调时间，能离心12x75mm的5ml试管)；2.固定或可调节的加样器及相应加样头若干：20ul,50ul,100ul,200ul,250ul，450ul，1ml；3.旋涡混匀器；4.烧杯，量筒或移液管，三个清洁的玻璃或塑料带盖试剂瓶(50-100ml)，一个棕色瓶，漏斗，滤纸；5.300目过滤尼龙网；6.可放置12x75mm的5ml试管的试管架2－3个；7.PBS溶液和蒸馏水：0.22μm滤膜过滤；8.NaClO：分析纯，有效氯浓度10%；9.每天需要一管2ml的抗凝的人血样本(最好是EDTA-K3抗凝)；10.多聚甲醛。附附附附1：：：：PBS配制方法：800ml蒸馏水中溶解NaCl8.0g；KCl0.2g；Na2HPO41.44g；KH2PO40.24g；调节pH到7.2～7.4（用HCl或NaOH调节，各地蒸馏水的酸碱度不同），加蒸馏水定容至1L，0.22μm滤膜过滤后，室温保存。附附附附2：：：：多聚甲醛配制方法：贮存液用PBS配制4%多聚甲醛溶液，待完全溶解后（溶解时需要不断搅拌，加热的温度小于50℃,可加入1N的NaOH溶液加速溶解），调整PH值在7.2~7.4，并用0.22μm的滤膜过滤后置于2-8°C保存。使用时，用PBS稀释为2%浓度的应用液。应用液2-8°C存放，可使用一周。FACSCantoII中文中文中文中文培训手册培训手册培训手册培训手册4FACSCanto(II)开机程序开机程序开机程序开机程序1、打开稳压器电源，打开位于仪器左侧的总电源，将同时开启仪器、液流车以及激光电源。2、启动计算机，在出现的登陆对话框中，输入用户名和密码，点击“OK”。。观察桌面右下角系统时间旁的网络图标中有一个显示仪器与电脑已连接。3、运行软件，双击桌面上的快捷方式。BDFACSCanto临床软件BDFACSDiva软件4、在BDFACSDiva软件出现的登陆对话框中，无需输入用户名和密码，直接点击“OK”；在BDFACSCanto临床软件出现的登陆对话框中，输入密码“BDIS”，点击“OK”进入软件。5、在“仪器框”中确认软件已经和仪器相连接；如果有必要，选择CytometerConnect；6、在“仪器框”中查看液面水平，过低液面和已满废液显示红色。FACSCantoII中文中文中文中文培训手册培训手册培训手册培训手册57、选择CytometerFluidicsStartup开启液路，出现显示进程的对话框。液路启动完毕（complete）后，点击“OK”。在液路启动的过程中，不要放上样品管，否则清洗液和废液会返流入样品管。液路启动程序会移去管道中关机液，用鞘液代替。8、激光预热，完成后，会在“仪器框”的底部显示“systemready”（系统准备完毕）。9、打开流动室的门，检查流动室有没有气泡。排除流动室中的气泡，选择CytometerCleaningModesDe-gasFlowCell，出现显示进程的对话框。检查这里有没有气泡鞘液废液关机液清洗液FACSCantoII中文中文中文中文培训手册培训手册培训手册培训手册6点击“OK”，检查流动池，若还有气泡，可重复上述操作。10、仪器可以开始工作。FACSCanto(II)关机程序关机程序关机程序关机程序1、在browser中指定任意一管tube，样本管中盛有0.5%-1%次氯酸钠，高速跑样5min。2、换DI水，高速跑样至少5min，然后取下样本管3、选择CytometerFluidicsShutdown；运行“关闭液路”程序将所有管路中的鞘液排出，并用清洗液和关机液清洗这些管道。此操作将避免液体管道由于盐的结晶而堵塞。4、出现系统可以关闭的提示后，点击“OK”；5、退出软件，关闭计算机；6、关闭仪器总电源；7、关闭稳压电源。FACSCantoII中文中文中文中文培训手册培训手册培训手册培训手册7BDFACSCantoBDFACSCantoBDFACSCantoBDFACSCanto临床软件进行仪器日常质控临床软件进行仪器日常质控临床软件进行仪器日常质控临床软件进行仪器日常质控（（（（QCQCQCQC））））无论在BDFACSCanto临床软件或者是在BDFACSDiva软件中运行样本，都需要使用BDFACSCanto临床软件来运行自动化设置和QC。利用BDFACS7色设置微球，对检测器电压进行调节，把设置微球调整在预定的靶值位置，对检测灵敏度值进行测量，并且对荧光补偿值进行计算并保存荧光补偿的资料。使用BDFACSCanto临床软件中的Levey-Jennings功能，按时间追踪并监测流式细胞仪性能，留下参数的变化和趋势。1．准备BDFACS7色设置微球：取一只BDFACS7色设置微球样本管，加稀释液至刻度线（约1ml），充分混匀。2．按每日开机程序打开流式细胞仪主机和电脑，打开FACSCanto临床软件并登陆，启动液路。3．选择“Cytometer（流式细胞仪）”→“Setup（设置）→StandardSetup（标准设置）。4．在“SetupLotInformation(设置批号信息)”对话框中点击“NewLotID（新批号）”。5．输入相应微球批号及失效期，并点击“OK”。6．按照BDFACS7色校准微球标签上所显示的信息输入或检查LotID(批号)、targets(靶值)及spectraloverlapfactors(光谱叠加因子)，输入完毕后点击“Next”。7．仪器显示SaveSetupBeadLotInfo(保存校准微球批号信息)对话框，点击“Yes”FACSCantoII中文中文中文中文培训手册培训手册培训手册培训手册88．选择“RunsetupinManualmode(手动执行校准)”，点击“Next”。9．仪器显示如下提示框，充分摇匀微球样本管，将废液吸引臂推到最左边，上样，点击“OK”。10．校准过程自动进行，待软件出现如下提示框时，取下样本管。11．如校准成功，仪器显示“SetupCompletedSuccessfully(成功完成校准)”。软件将报告以PDF格式按如下路径及文件名自动保存（C:\ProgramFiles\BDFACSCantoSoftware\SetupReports\SetupReport_yyyyMMdd_hhmm.pdf）。点击“Finish(完成)”，校准结束。FACSCantoII中文中文中文中文培训手册培训手册培训手册培训手册9运行运行运行运行HLAHLAHLAHLA----B27B27B27B27校准校准校准校准1111．．．．试剂准备试剂准备试剂准备试剂准备：：：：取HLA-B27试剂盒中的HLA-B27calibrationbeads试剂，混匀，加两滴到装有1ml鞘液的试管中，混匀，待测。2222．．．．FACSCantoFACSCantoFACSCantoFACSCanto临床软件上机检测临床软件上机检测临床软件上机检测临床软件上机检测HLAHLAHLAHLA----B27B27B27B27的具体步骤的具体步骤的具体步骤的具体步骤在运行HLA-B27校准前仪器必须成功通过BDFACS7色微球的校准且不超过24小时。1．打开FACSCanto临床软件，在Cytometer菜单下选择Setup，在Setup右侧出现的下拉菜单中选择HLA-B27Setup，出现如下HLA-B27校准对话框。2．在右侧框中输入正确的HLA-B27LotID值、Suffix值和BeadsLotID值、Suffix值。这些参数分别决定了FL1PMT的标准和decisionmarker的位置。对于结果至关重要，不可弄错。点击Start，出现如下对话框，手动上样后点击OK。3．仪器开始自动校准FITC电压，完成后仪器会在窗口底部出现一行提示：Setupcompletedsuccessfully。软件将报告以PDF格式按如下路径及文件名自动保存（C:\ProgramFiles\BDFACSCantoSoftware\SetupReports\HLAB27_yyyyMMdd_hhmm.pdf）。4．点击Save，保存校准结果即仪器设置条件。软件将HLA-B27校准结果自动保存在C:\Pr