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©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation液相色谱教程液相色谱教程液相色谱教程液相色谱教程液相色谱原理液相色谱原理液相色谱原理液相色谱原理©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation色谱法简介色谱法简介色谱法简介色谱法简介色谱法简介色谱法简介色谱法简介色谱法简介色谱法色谱法色谱法色谱法((((Chromatography))))溯源溯源溯源溯源–100100100100多年前俄国植物学家多年前俄国植物学家多年前俄国植物学家多年前俄国植物学家Tswett(茨维特茨维特茨维特茨维特)分离植物色分离植物色分离植物色分离植物色素时采用的实验方法素时采用的实验方法素时采用的实验方法素时采用的实验方法–他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直立玻璃管立玻璃管立玻璃管立玻璃管,,,,再加入石油醚使其自由流下再加入石油醚使其自由流下再加入石油醚使其自由流下再加入石油醚使其自由流下,,,,结果色素中结果色素中结果色素中结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带–Tswett用希腊语用希腊语用希腊语用希腊语chroma((((色色色色))))和和和和graphos((((谱谱谱谱))))描述他描述他描述他描述他的实验方法的实验方法的实验方法的实验方法，，，，即现在的即现在的即现在的即现在的Chromatography((((色谱法色谱法色谱法色谱法))))©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation•一根长玻璃管填充碳酸钙的一根长玻璃管填充碳酸钙的一根长玻璃管填充碳酸钙的一根长玻璃管填充碳酸钙的颗粒颗粒颗粒颗粒•将碾碎之植物叶片的提取液将碾碎之植物叶片的提取液将碾碎之植物叶片的提取液将碾碎之植物叶片的提取液灌入柱中灌入柱中灌入柱中灌入柱中•随着石油醚提取液向下流过随着石油醚提取液向下流过随着石油醚提取液向下流过随着石油醚提取液向下流过柱子柱子柱子柱子，，，，现出展宽的色带现出展宽的色带现出展宽的色带现出展宽的色带•分离出不同的化合物分离出不同的化合物分离出不同的化合物分离出不同的化合物Chromato--颜色颜色颜色颜色Graphy--图像图像图像图像TswettTswett的实验的实验的实验的实验的实验的实验的实验的实验注注注注:Tswett：：：：俄文的意思是颜色俄文的意思是颜色俄文的意思是颜色俄文的意思是颜色©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation色谱法原理色谱法原理色谱法原理色谱法原理色谱法的原理色谱法的原理色谱法的原理色谱法的原理–是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,,,,分配分配分配分配,,,,吸附等化吸附等化吸附等化吸附等化学作用性能的差异学作用性能的差异学作用性能的差异学作用性能的差异,,,,当两相作相对运动时当两相作相对运动时当两相作相对运动时当两相作相对运动时,,,,使各组分在两相中使各组分在两相中使各组分在两相中使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离反复多次受到上述各作用力而达到相互分离反复多次受到上述各作用力而达到相互分离反复多次受到上述各作用力而达到相互分离–两相中有一相是固定的两相中有一相是固定的两相中有一相是固定的两相中有一相是固定的,,,,叫作叫作叫作叫作固定相固定相固定相固定相(StationaryPhase),,,,有一相是流动的有一相是流动的有一相是流动的有一相是流动的,,,,称为称为称为称为流动相流动相流动相流动相(MobilePhase),流动相又叫流动相又叫流动相又叫流动相又叫洗脱剂洗脱剂洗脱剂洗脱剂,溶剂溶剂溶剂溶剂相相相相(Phase):–物理化学术语物理化学术语物理化学术语物理化学术语,特指在某一系统中特指在某一系统中特指在某一系统中特指在某一系统中,具有相同成分及相同物理具有相同成分及相同物理具有相同成分及相同物理具有相同成分及相同物理、、、、化学性质的均匀物质部分化学性质的均匀物质部分化学性质的均匀物质部分化学性质的均匀物质部分。。。。各相之间有明显可分的界面各相之间有明显可分的界面各相之间有明显可分的界面各相之间有明显可分的界面。。。。©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation色谱法原理色谱法原理色谱法原理色谱法原理分离是一个物理过程。固定相固定相固定相固定相(StationaryPhase)流动相流动相流动相流动相(MobilePhase)进样进样进样进样(Injection)洗脱洗脱洗脱洗脱(Elution)相互作用相互作用相互作用相互作用(Interaction)©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation色谱法的分类色谱法的分类色谱法的分类色谱法的分类按流动相的按流动相的按流动相的按流动相的物态物态物态物态分分分分::::—气相色谱气相色谱气相色谱气相色谱(GasChromatography,GC)用气体作为流动相用气体作为流动相用气体作为流动相用气体作为流动相((((又叫载气又叫载气又叫载气又叫载气))))—液相色谱液相色谱液相色谱液相色谱(LiquidChromatography,LC)用液体作为流动相用液体作为流动相用液体作为流动相用液体作为流动相((((又叫洗脱剂又叫洗脱剂又叫洗脱剂又叫洗脱剂))))按固定相的按固定相的按固定相的按固定相的形态形态形态形态分分分分::::—平面色谱平面色谱平面色谱平面色谱o纸色谱纸色谱纸色谱纸色谱o薄层色谱薄层色谱薄层色谱薄层色谱—柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation色谱法分类示意图色谱法分类示意图色谱法分类示意图色谱法分类示意图色谱液相色谱柱色谱纸色谱薄层色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱HPLCHPLCHPLCHPLC气相色谱©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation色谱法的分类色谱法的分类色谱法的分类色谱法的分类按流动相和固定相的按流动相和固定相的按流动相和固定相的按流动相和固定相的相对极性相对极性相对极性相对极性分分分分::::–正相色谱正相色谱正相色谱正相色谱(NormalPhaseChromatography)o固定相的极性大于流动相固定相的极性大于流动相固定相的极性大于流动相固定相的极性大于流动相–反相色谱反相色谱反相色谱反相色谱(ReversedPhaseChromatography)o固定相的极性小于流动相固定相的极性小于流动相固定相的极性小于流动相固定相的极性小于流动相有机化合物的极性有机化合物的极性有机化合物的极性有机化合物的极性–分子间作用力分子间作用力分子间作用力分子间作用力(静电引力静电引力静电引力静电引力,偶极力偶极力偶极力偶极力,色散力色散力色散力色散力,氢键力氢键力氢键力氢键力…)综合表现的一综合表现的一综合表现的一综合表现的一种描述种描述种描述种描述注意注意注意注意::::此分类法仅适用于液相色谱此分类法仅适用于液相色谱此分类法仅适用于液相色谱此分类法仅适用于液相色谱©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation有机化合物极性示例有机化合物极性示例有机化合物极性示例有机化合物极性示例CH3COOCH3溶剂样品的官能团极性非极性水甲醇异丙醇乙腈THF乙酸乙酯CH2Cl2CHCl3己烷NH3X/ArOH/RCOOHCNH2ROHRCN醛/酮N(R)2NO2卤代烷烃烷烃©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation色谱法的分类色谱法的分类色谱法的分类色谱法的分类按分离过程的按分离过程的按分离过程的按分离过程的机理机理机理机理分分分分::::—吸附色谱吸附色谱吸附色谱吸附色谱((((AbsorptionChromatography))))o根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离—分配色谱分配色谱分配色谱分配色谱((((PartitionChromatography)o分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度((((分配系数分配系数分配系数分配系数))))不同不同不同不同—离子交换色谱离子交换色谱离子交换色谱离子交换色谱((((IonExchangeChromatography)o根据样品组份离子交换亲和力的差异分离根据样品组份离子交换亲和力的差异分离根据样品组份离子交换亲和力的差异分离根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,,,,简称离子色谱简称离子色谱简称离子色谱简称离子色谱((((IC))))—体积排除色谱体积排除色谱体积排除色谱体积排除色谱((((SizeExclusionChromatography))))oGPC(GelPermeationChromatography))))•固定相是疏水性凝胶固定相是疏水性凝胶固定相是疏水性凝胶固定相是疏水性凝胶,,,,流动相是有机溶剂流动相是有机溶剂流动相是有机溶剂流动相是有机溶剂oGFC(GelFiltrationChromatography)•固定相是亲水性凝胶固定相是亲水性凝胶固定相是亲水性凝胶固定相是亲水性凝胶,,,,流动相是水溶液流动相是水溶液流动相是水溶液流动相是水溶液©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法—HPLC(HighPerformanceLiquidChromatography)—是一种区别于经典液相色谱是一种区别于经典液相色谱是一种区别于经典液相色谱是一种区别于经典液相色谱,,,,基于仪器方法的高效能分离手段基于仪器方法的高效能分离手段基于仪器方法的高效能分离手段基于仪器方法的高效能分离手段::::o高性能色谱柱高性能色谱柱高性能色谱柱高性能色谱柱,,,,高精度输液泵高精度输液泵高精度输液泵高精度输液泵,,,,高灵敏度检测器高灵敏度检测器高灵敏度检测器高灵敏度检测器…—广泛应用于各个领域广泛应用于各个领域广泛应用于各个领域广泛应用于各个领域::::o医药医药医药医药,,,,环保环保环保环保,,,,石化石化石化石化,,,,生命科学生命科学生命科学生命科学,,,,食品工业食品工业食品工业食品工业,,,,农业农业农业农业…—无论在技术上无论在技术上无论在技术上无论在技术上,,,,理论上理论上理论上理论上,,,,还是在应用上仍有较大的发展空间还是在应用上仍有较大的发展空间还是在应用上仍有较大的发展空间还是在应用上仍有较大的发展空