岛津液相维修培训

欢迎参加岛津液相维修培训班•采用“HPLC”级溶剂•避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂•对试样有适宜的溶解度•溶剂粘度要小•与检测器相匹配流动相的选择其他问题其他问题•水的等级–纯化水–蒸馏水–去离子水波长(nm)纯化水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物吸光率其他问题水/MeOH梯度ODS柱鬼峰1ml/min,0-100%MeOHover10minsandholdfor15mins.鬼峰的出现其他问题•溶剂的等级–HPLC级–优级纯–分析纯都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱其他问题甲醇乙睛正己烷分析纯级和HPLC级溶剂的吸光度比较图其他问题溶剂的过滤滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形3）检测器中的气泡产生基线波动其他问题脱气的目的1.防止由气泡的产生引起的故障2.防止由溶解（在液体中的）气体量的变动引起的检测不稳定程度1）示差折射率检测器*使折射率变化2）UV检测器（200nm以下）*溶解氧气有吸收3）荧光检测器*溶解氧气有消光作用其他问题其他问题脱气的方法1.超声波脱气法2.He清除法3.使用氟树脂膜的减压脱气法其他问题He清除法调压阀排气阀往送液泵流动相过滤器其他问题氟树脂膜真空室往送液泵真空泵控制器流动相使用氟树脂膜的减压脱气法梯度洗脱法梯度洗脱装置：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。梯度洗脱：优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度梯度洗脱法的注意点溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差梯度混合的溶剂互溶性要好梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）查看空白实验的数据。遵守分析周期。（最初的分析数据不采用）样品处理1.使用流动相溶解样品--减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要--保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀其他问题缓冲液选择缓冲液的步骤1.确定最佳分离状态时的流动相pH2.选择具有与流动相的pH相近的pKa的缓冲液（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液）3.确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液）一些代表性弱酸的pKapK1pK2pK3醋酸4.87柠檬酸3.134.766.40磷酸2.167.2112.32其他问题缓冲液的使用使用前必须过滤使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:用纯水冲洗30-60min（1ml/min），再用甲醇冲洗30min易受到细菌和霉菌的影响不能直接用有机溶剂冲洗液相色谱容易出问题的部件维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器管线选择材料不锈钢TeflonPEEK(聚醚酮)尺寸0.1mmI.D.x1.6mmO.D.0.3mmI.D.x1.6mmO.D.0.5mmI.D.x1.6mmO.D.0.8mmI.D.x1.6mmO.D.管线材料•不锈钢(可用于所有连接)–能承受几千kg/cm2压力–酸性或高浓度盐环境中易腐蚀(尤其在pH小于2时)•PEEK(可用于所有连接)–能承受高达250kg/cm2压力–可在整个PH范围(pH1-14)内使用–不适用于高溶解性溶剂如氯仿等•Teflon(用于柱后阻尼管、反应管和排液管)–化学惰性大–能承受5kgf/cm2压力材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断吸滤头液相色谱容易出问题的部件LC-10ATvp泵：串联式往复泵LC-10ADvp泵：并联式往复泵液相色谱容易出问题的部件液相色谱容易出问题的部件单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头流动相单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头液相色谱容易出问题的部件故障1：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压，使宝石球与垫片分开2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗单向阀液相色谱容易出问题的部件故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗单向阀故障：密封圈磨损而导致密封不良现象：系统压力波动大或漏夜措施：更换密封圈注意点：更换密封圈拆卸泵头前，柱塞杆复位（P－SET）柱塞密封圈流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈液相色谱容易出问题的部件故障：堵塞现象：系统压力波动大或压力偏高措施：5％稀硝酸，超声波清洗判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力3kgf/cm2，则可能堵塞。线路过滤器排液阀压力传感器线路过滤器流动相液相色谱容易出问题的部件液相色谱容易出问题的部件进样器•自动进样器•手动进样器•原理：（六通阀）•注入方式：•1）全量注入•2）部分注入液相色谱容易出问题的部件进样量和检测器响应的关系示意图进样体积检测器响应值定量环体积的一半3倍定量环体积全量注入部分注入手动进样器的原理图装填状态进样状态交叉污染的原因•便捷的方法（不需清洗）•1.进样状态下插入微量注射器•2.切到装填状态•3.注入样品•4.切回到进样状态手动进样法•操作注意点：•1）插针应插到底•2）进样应使用液相色谱专用平头进样针•3）清洗应使用专用针口清洗器手动进样器定子转子塑料箍弹簧不锈钢套液相色谱容易出问题的部件手动进样阀故障：转子密封损坏现象：漏液原因：a拧的太紧b样品太脏c针头损坏或不使用液相专用针解决措施：更换转子密封，并在使用液相色谱容易出问题的部件液相色谱容易出问题的部件手动进样阀故障：载样困难原因：a定量环堵塞b进样器污染解决措施：清洗或更换定量环、进样器液相色谱容易出问题的部件•分析结果重现性好•提高柱效•降低柱压•保证检测稳定性柱子故障：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留时间的改变解决措施：清洗正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05M稀硫酸液相色谱容易出问题的部件液相色谱容易出问题的部件峰产生有肩或分叉的原因1.柱子劣化（进口处产生不均匀的空隙）2.样品劣化（生成氧化物、分解物等）判断标准所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化延长柱寿命方法：倒冲柱换过滤片修补柱头液相色谱容易出问题的部件液相色谱容易出问题的部件柱的补修填料的取出液相色谱容易出问题的部件恢复例液相色谱容易出问题的部件硅胶基底聚合物基底pH范围2-7.5宽范围有机溶剂所有有限制压力〈250kgf/cm2低压温度宽范围〈60C色谱柱的类型及适用范围液相色谱容易出问题的部件分析柱的维护1.在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下(0.2-0.3ml/min)冲洗30mins，长时间未用的分析柱也要同样处理2.定期使用强溶剂冲洗柱子3、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗4、净化样品5、分离条件6、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯7、使用预柱8、避免流动相组成及极性的剧烈变化9、避免压力脉冲的剧烈变化液相色谱容易出问题的部件•柱压低于150kgf/cm2•柱温在40℃左右，最高使用温度为50℃•缓冲液PH使用范围为2～7•流动相有机溶剂比例过低,柱效下降快硅胶在PH为3～4时稳定性最好碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。ODS柱的使用注意点：液相色谱容易出问题的部件紫外检测器参比池样品池光线光电倍增管液相色谱容易出问题的部件更换氘灯（紫外检测器）•判断氘灯能量：设定220nm波长，检查参比池能量，如能量低于800，需更换氘灯。•操作注意点：不要用手直接接触氘灯表面液相色谱容易出问题的部件液相色谱容易出问题的部件故障：样品池受污表现：样品池和参比池能量相差较大检查方法：设定250nm波长，通甲醇或水，查看SMPLEN和REFEN，如两者相差较大，则样品池受污。措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重，拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。紫外检测器示差折光检测器•原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。•优点：通用型检测器，•缺点：•1）对温度变化敏感•2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测•3）属于中等灵敏度的检测器液相色谱常见问题及其对策液相色谱常见问题类型A.压力异常（偏高、波动）B.漏液C.保留时间漂移D.基线问题（漂移、噪声）E.峰形异常现象：无压力，流动相不流动可能原因1、保险丝断或电源问题2、柱塞杆折断3、泵头内有空气或流动相不足4、单向阀损坏5、漏液6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)压力异常现象：压力持续偏高或不断上升1、流速设定过高2、保护柱或柱子筛板堵塞3、流动相使用不当或有缓冲盐析出4、色谱柱选择不当5、进样阀损坏6、线路过滤器堵塞压力异常压力异常现象：压力持续偏低1、流速设定过低2、色谱柱选择不当3、柱温过高4、系统漏液现象：压力持续偏低1、流速设定过低2、色谱柱选择不当3、柱温过高4、系统漏液压力异常压力异常现象：压力波动可能原因1、泵头中有气泡2、单向阀损坏3、柱塞密封圈损坏4、脱气不充分5、系统漏液6、使用了梯度洗脱漏液接头处漏液1、接头处松动2、接头磨损3、接头被污染4、部件不匹配漏液泵漏液1、单向阀松动2、泵密封损坏3、放空阀损坏4、接头松动（不要拧的太紧）漏液泵漏液1、单向阀松动2、泵密封损坏3、放空阀损坏4、接头松动（不要拧的太紧）进样阀漏液可能原因1、转子密封损坏2、定量环堵塞3、进样口密封松动4、进样针尺寸不合适5、废液管产生虹吸6、废液管堵塞漏液检测器漏液可能原因1、流通池垫片损坏2、流通池透镜破碎3、手紧接头处漏液4、进样针尺寸不合适5、废液管堵塞6、流通池堵塞漏液保留时间漂移可能原因1、柱温变化2、流动相组分变化3、色谱柱没有平衡4、流速变化5、泵中有气泡6、流动相选择不当7、键合相流失8、缓冲容量不够保留时间漂移基线漂移可能原因1、温度波动2、流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂)3、流通池被污染或有气泡4、流通池窗口破裂5、流动相配比不当或流速变化6、柱子平衡（约30－60min）基线问题基线漂移可能原因7、流动相污染，变质或由低品质溶剂配成8、样品中有强保留的物质以馒头样峰被洗出9、检测器没有设定在最大吸收波长处基线问题基线噪声（规则的）可能原因1、流动相、泵、检测器中有气泡2、有地方漏液3、流动相混和不均匀4、温度影响（检测器和柱温差别太大）5、其他电子设备的影响基线问题基线噪声（不规则的）可能原因1、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、有地方漏液3、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀4、流通池污染5、检测池能量不足6、系统内有气泡基线问题前沿峰、拖尾峰可能原因1、柱塞板堵塞2、色谱柱塌陷3、柱外效应4、干扰峰5、缓冲不足或不合适6、化学或次级保留（硅羟基效应）峰形异常前沿峰、拖尾峰可能原因7、重金属污染8、样品溶剂选择不当9、样品过载10、柱温过低峰形异常分叉峰可能原因1、保护柱或分析柱污染2、样品溶剂不溶于流动相峰形异常峰展宽1.进样体积过大2.流动相粘度过高3.检测池体积过大4.保留时间过长5.柱外体积过大6.样品过载峰形异常峰变形可能原因1、样品过载2、样品溶剂选择不当峰形异常鬼峰1、进