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显微镜基础知识光学基础:安全:(图标含义,自身的保护)注意本标识提示某项说明需要特别注意。警告本标识提示可能对仪器或系统存在某种潜在的危害。警告本标识提示可能对使用者存在潜在的危害。警告注意高温表面。警告注意UV辐射。警告仪器在打开前需断开电源。安全:图标的含义显微镜基础知识光学基础:安全:(图标含义,自身的保护)自身的保护:(UV辐射,烫伤,用电安全)UV光源对眼睛有很大的伤害,可以导致视网膜脱落,造成终身失明,因此调节的时候一定要注意保护眼睛,尽量通过调节工具来调节中心.另外非常强的可见光源依然会损伤眼睛,因此不要用眼睛直视光源部分.尽量通过保护屏来观察.HBO光源和HAL100卤素灯光源的灯箱外壳和灯泡部分在使用时或刚刚关闭的时候不要用手接触,以免烫伤.HBO灯泡内含有汞蒸汽,因此使用时要小心在拆卸显微镜的带电部分的时候,一定要将电源线拔下,彻底断电.以保护自身安全.显微镜基础知识光学基础:显微镜光路整体结构图正置显微镜PrimoStarAxioStarplusAxioSkop40AxioScopeA1AxioImager显微镜基础知识光学基础:显微镜光路整体结构图倒置显微镜AxioObserverAxiovert200Axiovert40显微镜基础知识光学基础:显微镜光路整体结构图体视显微镜(解剖镜)StemiDV4Stemi2000DiscoveryV8DiscoveryV12/20DiscoveryLumar体式镜常用分辨率表示方式是：每mm能分辨的最多线数=1000N.A/0.61λλ=0.55um显微镜基础知识BF明场采用透射光直接观察样本(透射,反射)PH相差利用被检物体的光程（折射率x厚度）差进行镜检DIC微分干涉通过特制的棱镜将偏振光分解和合成,增强光程差使得样品-PlasDIC呈现出立体图像塑料微分干涉FL荧光通过特定光源的照射,使得样品发出特定颜色的光POL偏光通过偏镜和检偏镜,使用偏振光来观察样品DF暗场利用丁道尔(Tyndall)现象，微粒对斜射光反射或衍射，增大了人眼可见性光学基础:常见观察模式显微镜基础知识BF明场应用领域：常规镜检、病理、染色标本优点：视野亮度高、均匀，应用范围广，操作简单，价格低，物镜适用于荧光观察缺点：透明标本对比度低，标本没有立体感显微镜基础知识PH相差优点：鉴定活体细胞最实用、最经济的方法缺点：需要特殊的相差物镜(PH)需要光强高切片不能太厚(5~10um)盖片、载片需符合标准最好配用单色滤光镜操作较麻烦荧光效果不如明场物镜显微镜基础知识PH相差相差物镜聚光镜内带相差环PH1/2/3(阿拉伯数字)显微镜基础知识DIC微分干涉显微镜基础知识DIC微分干涉DIC物镜聚光镜内带DIC棱镜DICI/II/III(罗马数字)检偏器显微镜基础知识DIC微分干涉检偏器聚光镜内带DIC棱镜DICI/II/III(罗马数字)DIC物镜显微镜基础知识FL荧光优点：检出能力高（放大作用）对细胞的刺激小（可以活体染色）能进行多重染色用途：物体构造的观察——荧光素荧光的有无、色调比较进行物质判别——抗体荧光等发荧光量的测定对物质定性、定量分析显微镜基础知识FL荧光荧光模块荧光光源显微镜基础知识FL荧光荧光滤色块参数例如:Filterset02shiftfreeEXG365,BSFT395,EMLP420488002-9901-000其中EX365(BP带通)BS390EMLP420/BP450/20显微镜基础知识高级荧光1使用CCD成像(单张,多通道)2使用共聚焦成像(单张,多通道,光谱)光谱意味着可以拆分成不同的颜色通道,可以分析更多的成分显微镜基础知识显微镜基础知识POL偏光应用：矿物质、化学物品鉴别鉴别纤维、染色体、淀粉粒、细胞中晶体植物病理检验鉴别骨骼、牙齿、胆固醇、神经纤维、肿瘤细胞、横纹肌和毛发等冰尿晶显微镜基础知识POL偏光检偏器起偏器石膏片/石英片显微镜基础知识DF暗场优点：观察到极其微小物体，分辨率可达0.02~0.004um(明场0.4um)—”超显微“。缺点：只能观察到物体存在、运动和外部形态不方便调节标本要求高（灰尘、盖片、载片）显微镜基础知识DF暗场暗场聚光镜显微镜基础知识硬件基础:(硬件拆解,安装,调节.各部件介绍)主机及附件的安装科勒照明的调节灯箱的拆解与灯泡的安装聚光镜内模块的安装荧光模块滤片的安装显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识灯箱的拆解与灯泡的安装显微镜基础知识HBO灯泡调节中心将调节工具4拔出,调节1,2,3,使得工具中显示如图5显微镜基础知识聚光镜内模块的安装显微镜基础知识荧光模块的拆解安装显微镜基础知识物镜类型放大倍率数值孔径无限远光学系统盖玻片厚度机械校正环观察方式标签放大倍率标签介质标签物镜符号的含义显微镜基础知识目镜的视场F.N20F.N23F.N25显微镜基础知识科勒照明的调节放一张你即将观察的样本(最好是染色的切片类样品)，使用10X物镜,明场照明状态（聚光镜转轮选择H或BF，荧光滤镜轮选择空位，DIC附件全部拉出光路，照相光路转换到观察状态,通过粗调和微调将样品调节到样本能观察到的最清楚的状态。然后不要再动调焦螺旋。2，将视场光栏调到最小的状态，如果显微镜的调节状态正确的话，此时在视野中应该可以看到一个边缘清楚的多边形(如下图)。显微镜基础知识如果看到的不是一个边缘清楚的多边形，则说明光路中的聚光镜上下位置不准确，此时通过调节聚光镜左手侧的上下调节旋钮使得视场中形成一个边缘清晰的多边形，此时的聚光镜位置就是Z轴上最佳位置，以后的调节或观察的时候都不要再移动其位置了。3，视野中的多边形的正确位置应该是在视野的正中心，如果不在说明聚光镜在水平面上有偏移，需要调节柯勒照明光路调节旋钮（聚光器对中螺钉）,通过调节聚光镜上的柯勒照明光路调节旋钮（两个银色的旋钮）使多边形在视野的中心。4，将视场光栏慢慢放大，当多边形正好外切于视场的时候就是视场光栏的最佳工作位置。在此过程中其他位置的调节不可以再动。显微镜基础知识软件基础:(版本说明,安装,配置,使用介绍)AxioVision版本从3.0~4.8.当前主要是的用4.5以上版本.版本是不可以无限升级的.原因是有的特殊硬件只支持到某个版本.如果只是显微镜和CCD的话,是可以升级的.计算机要求:至少1GM内存,独立的128M以上显卡,一块1394卡(贝尔金,或dell原装卡,这类卡的特点是绿色的),操作系统win2000SP4/xpSP2/vistahomePremiumSP1以上版本,屏幕分辨率在Y方向必须大于1024.Vistahomebasic版本不支持Axiovision软件软件安装时,加密狗(Dongle)必须拔下显微镜基础知识软件安装路径默认.驱动的安装汉化版的安装系统备份/软件界面的备份MTB的配置软件的默认参数比例尺的设置齐焦至目镜显微镜基础知识Axiovision软件默认参数显微镜基础知识图像调节亮度/对比度/伽吗值的调节(以及参数和曲线的含义)参数的测量以及输出显微镜基础知识CCD的成象原理ElectricalConnectionPolysiliconGateSiliconDioxideSiliconeeeeeCCD结构示意图显微镜基础知识CCD基本原理显微镜基础知识CCD基本原理显微镜基础知识CCD基本原理显微镜基础知识彩色CCD的成象模式ColorPixelSeparation显微镜基础知识HRC原理显微镜基础知识1.CCD分辨率2.灵敏度(QE值)3.暗电流4.彩色成像方式5.拍摄速度6.Binning模式选购相机需要注意的参数显微镜基础知识ZEISS的CCD家族相机型号最高分辨率适用范围AxiocamHRc4164X3120高分辨率的彩色照片AxiocamHRm4164x3120高分辨率的黑白照片AxiocamMRc52584x1936常规彩色AxiocamMRm1388x1040荧光AxiocamMRC1388x1040快速彩色AxiocamICC11392x1038低端彩色AxiocamICC32080x1540低端彩色AxiocamHSm660x494(60fps)超高速黑白显微镜基础知识光学系统的清洁清洁用品及工具a).无水乙醚乙醇混合液(7:3混合)—用于一般光学系统表面污渍的清除。b)吹风球—用于清除灰尘及异物。c)软毛刷—用于清除灰尘及异物。d)镜头纸.木棒或棉签.长纤维脱脂棉光学系统清洁的原则总原则是能不擦的就不要擦.原因是现在的光学系统表面一般情况下都会有镀膜,经常用力擦拭会破坏膜结构,造成系统光学性能下降.清洁顺序应该是先用吹风球吹,再使用软毛刷清洁,如果还是不行,再使用清洁液擦拭显微镜基础知识木棒或棉签的使用方法:在其一端卷绕上脱脂棉用于擦拭镜片。显微镜基础知识需清除尘埃的部位注意：应该经常对如图所示的4个部位进清洁。显微镜基础知识清洁保养的顺序及部位先用吹风球或软毛刷由上而下地清除附着在显微镜片表面，载物台表面和机架表面的灰尘及其它异物。对一般用户来说只需且只能经常清洁擦拭目镜，物镜，聚光器，集光镜等表面镜片。对于其他镜片或仪器内部的污染物的清洁请联系zeiss工程师来解决。(并非所有的光学部件都能使用有机溶剂擦拭)显微镜基础知识各类镜片的擦拭a)附着于光学镜片上的灰尘和污脏物部位的识别：边观察边转动相关的透镜，如果污渍随镜片的转动而转动，就可以判断其所处在的位置是在镜片上。否则就是光路的其他镜片上擦拭镜头的基本操作是从中央部位开始擦起，采用螺旋渐进的方式逐步地擦到边缘。第一次一定不要用力,以后每次逐渐的加力,要不断地重复擦拭，直到镜片完全清洁为止。且方向必须固定显微镜基础知识c）目镜的擦拭将脱脂棉卷绕在一根棉签上,尖端沾点混合液，在目镜镜片上按螺旋状擦拭。物镜的擦拭方法与目镜相同。特别注意，油镜每次用过必须立即把油擦净。显微镜基础知识e）聚光器及集光镜的擦拭用手或棉签卷绕镜头纸或脱脂棉擦拭聚光器顶镜。用棉签卷绕脱脂棉螺旋擦拭集光镜。显微镜基础知识金属，油漆部件及塑料部件的清洁对于金属部件上的手指印或油污，可用软布沾混合液擦去。油漆及塑料部件要用软布沾中性洗剂进行擦拭，然后用较干的干净软布把表面擦清洁。或用专门清洁剂进行擦拭。如果用有机溶剂擦拭，就有可能使塑料及油漆表面产生发白等变化，所以不要用有机溶剂。显微镜基础知识常见问题及处理方法显微镜基础知识显微镜基础知识显微镜基础知识高级部分电动显微镜的安装电动显微镜的部件介绍软件安装介绍,设置(MTB,多相机选择等等)软件使用(基本模块,拼图,Z-stack,时间序列,多通道荧光,景深扩展,颗粒度,晶粒度,多相,自动测量)软件高级模块(手动和自动测量增强版,分割,二值化等)显微镜基础知识