6Sigma在临床生化检测的应用:Architectc16000•KasalC,etal.EvaluationofgeneralchemistryassaysontheAbbottArchitectc16000clinicalchemistrysystem.ClinChem2007;53(S);A175.=15.5sAlbuminBCP=24.3sTotalBilirubin=11.9sCalcium=10.1sCholesterol=9.1sCreatinine=5.8sGlucose=5.9sTotalProtein=14.8sTriglycerides=14.2sLambert-Beer'sLaw当一束平行的单色光通过一定均匀的某吸收溶液时,该溶液对光的吸收程度与吸光物质的浓度c和光通过的液层厚度b的乘积成正比。这种关系称为朗伯-比尔定律,其数学表达式为。A=Kbcc=A*1/kbF=KbA称为吸光度,I0和I分别为入射光和透射光的强度,b为光通过的液层厚度,c为吸光物质的浓度,K为比例常数。b的单位为cm,若c的单位以mol/L表示,则用ε表示K,ε称为摩尔吸光系数,单位为L/(mol·cm);若c的单位以g/L表示,则用a表示K,a称为吸光系数,单位为L/(g·cm)。由于吸光度与吸光物质浓度的关系最为重要,有时又被简称比尔定律。光学检测原理•光路系统为直接光检测,后分光,采用凹面衍射光栅,有16个检测波长。光路系统主要组成有:卤钨灯,隔热玻璃,凸镜,Shutter,狭缝,反光镜,光栅,线性硅二极管矩阵,前置放大板,数据处理板和CPU板等。光路组件将光聚焦后射入反应杯,当反应杯中的物质发生化学反应时,其吸光度会发生变化。光经狭缝到光栅后被分成不同的波长,线性硅二极管矩阵根据不同波长进行检测。用单波长或双波长测定每个读数点,一般分析项目都使用双波长检测。关于反应时间•反应时间包括反应杯转盘的转动,转动的时间和转盘周围组件的位置•每次转动都发生在特定的时间和到达特定的位置•反应转盘按逆时针方向每4.5秒旋转近1/4圈(41个反应杯的位置)使反应杯到达特定位置•每一次旋转,有41个反应杯会经过光路系统,每个反应杯中的吸光度值都会被检测到关于反应的几个点1.起始位置,样品探针将样品吸入反应杯2.R1位置,试剂探针1将1试剂(或样品稀释液)加入反应杯3.无动作4.混匀位置1,样品和1试剂(或样品稀释液)被混匀4~5.反应杯经过光路系统被读取吸光度值5.以上总共转了4个1/4圈共164个反应杯位置,此位置为起始1号位置的后一个反应杯的位置(总共有165个反应杯)。如果样品需稀释,在此位置样品探针将稀释样品吸入放入1号位置的反应杯。31.如此样品进行ICT检测,在此位置被ICT系统的探针从反应杯吸入稀释样品进行检测67.R2位置,试剂探针2将2试剂加入反应杯(此前时间为5.1分钟)68.混匀位置2,样品/试剂1和试剂2被混匀6~135.为持续旋转孵育时间,当反应杯每经过一次光路系统将被读取吸光度值,总共最多33次读数136~164.反应杯清洗系统对反应杯进行8步清洗步骤165.此位置为到重新使用的1号位置前的最后一个循环位置(至此全部反应时间为9.6分钟)REACTIONTIMETABLEsamplemixsample&R1Cuvetteposition:1246768132136reagent2lastopticread4.594.95'4.54.8'Sample+R1(blankreading)Reaction(sample+R1+R2)washstart18readpoint1readpoint17readpoint18blankreadoptionreact.readtime/flexratereadoptionstartTotalreactiontime=9.9min.(sameforeachassay)-10-读数点示意图仪器详述分配组件加液量光路反应时间常见报警-6-雅培诊断各分配组件加液量详述范围步进SampleVolume样本体积:DSVol=DilutedsampleVolume:稀释样本Reagent1VolumeR1试剂量:Reagent2VolumeR2试剂量:SmartwashVolume智能冲洗洗液量Water/DiluentVolforConc.Reagent:浓缩试剂使用水或稀释液的量TotalVolumeinCuvette:反应杯最小量及最大量*Notincludingoveraspirationvolume**Water-andreagentvolumeentereddeterminethedilutionratio-7-VolumeTolerance:VolumerangeMin/MaxRangePrecision20to50µLnominal+/-5%/=2%51to345µLnominal+/-2.5%/=0.5%2to35µL0.1µLsteps2to15µL0.1µLsteps20to345µL1.0µLsteps20to345µl1µLsteps10to345µL1.0steps*0to345µL1.0µLsteps**Min.160µlMax.360µl光路详述波长SpecificationsOptions光径测量体积:读数点:吸光度范围吸光度线性-8-16340–380–404–412–444–476–500–524–548–572–604–628–660–700–748-8045mmMono-/Bichromatic(单或双)Min.160µLMax.360µLMonoReag.:1–33pointsBiReag.:1–16(Blank)17–33(Reaction)1–33(每18秒)-0.1to3.0AbsWithin+/-2%at2Abs项目反应类型-11-终点法:End–upEnd–down速率法(Kinetik):Rate–upRate-down-11-终点法:反应达到平衡单双试剂都可以使用双试剂推荐使用Selfblank反应类型–终点法1反应类型–终点法2TimeSampleDispense+R1R2addition=ReactionStart-9-123456789101112131415161718192021222324252627282930313233AbsorbanceTotalAbs–SelfblankAbs=未知样本浓度=DAbsxcalFactorDAbsTotalAbsDAbsSelfblankAbsselfblank可读点范围A1A2Absorbance反应类型–终点法2-13-R2addition=ReactionStartA1A2TimeSampleDispense+R1t1t2待测物浓度在定标的基础上进行计算Conc.sample(unknown)=(A1–A2)xcalfactor1161733Absreadingpoints反应类型–速率法1-11-酶类-使用因子物质-定标曲线-未达到平衡时段速率法:AbsorbanceTime反应类型–速率法2ForEnzymes–因子用于计算-12-SampleDispense+R1R2addition=ReactionStartA1A2A3A4A5A6A7A8...未知待测物浓度=DAbs变化/minxEnzymeFactororDAbs变化/secxFactorDAbschange/min=U/LDAbschange/sec=µkat/L1161733AbsreadingpointsFlexTimeReading酶的线性扩展样本稀释-91-雅培诊断速率法-FLEXTIMEREADING弹性速率AbsorbancePhotometricPointsSR1R2FlexReadTimeMainReadTime正常样本高浓度或高活性样本AbsRangeSubstrateDepletion-92-样本稀释加样本(2.0to35.0µL)用来稀释的反应杯用量反应的反应杯加入稀释液(10to345µL4.5sx1cycle混匀100µL或更多加入稀释后的样本(2.0to15.0µL)4.5sx1cycle4.5sx2cycles-94--42-样本稀释CCApplicationTraining-42-空白选择Self-BlankReagentBlank试剂空白(R1+R2+WaterasSample)(R1andSample)-43-终点法/速率法–试剂空白SampleDispensefirstReagentDispenseFirstMix定标过程使用R1+R2+(Sample)=水,生理盐水或定标液APhotometricPointsAbsorbance123456789101112131415161718192021222324252627282930313233SecondReagentDispenseSecondMixBLKAbsRange-44-错误代码报警解释BlankAbsorbanceRangeBLK一个或多个空白定标的吸光度超出BLK限定的范围终点法-SELFBLANKAbsorbancePhotometricPointSampleDispensefirstReagentDispenseFirstMixSecondReagentDispenseSecondMix151016Self-BlankMainReadTimeOptionDAbs1720253033-46-CCApplicationTrainingFlaggings定标-50-定标的报警设置7个检测功能:试剂空白吸光度检测定标重复次数间的离散度检测斜率检测FactorComparisonCheck*SD检测MonotonicCheck*ApproximationConvergenceError*-51-终点法/速率法–试剂空白SampleDispensefirstReagentDispenseFirstMix定标过程使用R1+R2+(Sample)=Water,SalineorCalibratorAPhotometricPointsAbsorbance123456789101112131415161718192021222324252627282930313233SecondReagentDispenseSecondMixBLKAbsRange-44-错误代码报警解释BlankAbsorbanceRangeBLK一个或多个空白定标的吸光度超出BLK限定的范围定标-离散度检测AbsorbanceConcentrationC1C2calibratordeviation-54-代码解释CalibratorabsorbancerangeDEV定标几次重复超出限定定标-斜率检测AbsorbanceConcentrationBlankCalibrator1min.&max.allowedSpani.e.betweenBlankandCal1xx-56-错误代码解释SlopeCheckSPN空白与指定定标点浓度间斜率超出范围定标方法定标推荐:在手册上没有官方的明确限定到定标周期或换批号时,建议全线定标换盒进行空白定标concconcconcAbsAbsAbsAold2Anew2Aold1Anew1Aold3Anew3OnepointisnewlymeasuredOtherdatapointsarecorrectedAnewcalibrationcurveisgenerated选项:Blank1-Point2-PointFull-31-定标设置-体积2PrintImportUpdateDeleteOKCancelDeletePrintUpdateLotChangeCtg.