05ELISA定性试验室内质控及失控后处理丁海明

ELISA定性试验室内质控及失控后处理ELISAELISA定性试验室内质控定性试验室内质控及失控后处理及失控后处理广东省中医院检验科广东省中医院检验科丁海明丁海明讲述概要质量控制概述、目的1目前质控的难点和方法2失控后的原因分析及处理3质量控制小结4概述™从1949年美国CollegeofAmericanPathologists（简称CAP）首先开始研究临床实验室室内质量控制（简称质控）问题，美国学者Levery和Jenning于1950年发表第一篇关于使用质控图的实验室室内质控，临床检验实验室的室内质控工作正式拉序幕。™卫生部临床检验中心免疫质控室从1988年开始在全国范围内开展乙肝标志物检验的质量评价活动。目的临床检验结果每次或每天之间不可能没有误差，以临床上不造成误诊与漏诊为基准，选择合适的室内质控方法以及失控后及时处理，保证检验质量。所以质控的目的：保证结果的一致性。所以质控的目的：保证结果的一致性。目前质控的难点“灰区”的设定灰区(又称盲区、域值)，简单解释：在Cutoff值附近上、下波动的吸光度值。它是一个范围，不是一个具体的数值。但是，“灰区”的范围为多少存在争议，到目前为止全国还没有统一定论，设置过宽或过窄都涉及一系列问题，如重复检测率、报告时间、检测人员的增加等等。有学者认为外部对照质控血清OD值以试剂盒临界值的2～3倍为宜。国外ELISA试剂通常定义一段“灰区”的检测范围，结果报告“可疑”，而国内无一厂家对灰区进行设定，各医疗机构对灰区的理解也未达成共识，在报告模式上则只报告阴性和阳性，因此普遍存在结果不一致的现象。能否“借用”生化成熟的质控方法？定性试验室内质控方法有其特殊性，不能照搬生化检测常用的室内质控方法和规则。目前常用质控方法“即刻法”L-J质控图法“即刻法”™由于ELISA法试剂盒有效期短，批号更换较频繁，短时间内难以积累20次质控物的检测结果，所以对同一批号试剂做L-J质控图易造成数据不足，难做出完整的质控图，不能“即时”进行试验监控，失去质控意义。举例1：“即刻法”计算SI上限值和下限值。SI上=（Xmax-X）/SSI下=（X-Xmin）/S对照SI表，检查是否失控，SI上、下限≤规定值，在控；SI上、下限规定值，失控。SI值表NN3sN2sNN3sN2s31.151.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.11.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.5102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56举例1：“即刻法”在实际工作中，只要有3个以上的数据即可决定是否有异常值的存在，但是，当检测数据20次时，其质控结果会出现较大误差。宋宏先等学者已指出，从理论上讲“即刻法”不适用于ELISA法的室内质量控制。即使使用“即刻法”，笔者也曾经讨论过，只有在一定条件下才能使用。宋宏先，张吉才，郭建华.“即刻法室内质控存在的问题探讨.检验医学,2004，19(3):269-270丁海明,潘婉仪.ELISA定性实验“即刻法室内质控的评价与应用.现代检验医学杂志，2009,24（3）：28-30举例2：L-J质控图法举例2：L-J质控图法从图中可以直观判断：所有质控值均在控（质控规则为X±3SD）“半固定”范围法（个人观点）以HBsAg、HBeAb为例HBsAgS/C.O值采用质控下限1.0（固定），上限为X+3SD；HBeAb的S/C.O质控上限1.0（固定），下限为X-3SD值。（固定相当于容忍底线）丁海明，潘婉仪.ELISA定性实验“室内质控方法探讨.现代检验医学杂志，2011,26（3）：159-164举例3：“半固定”范围法（一）举例3：“半固定”范围法（一）70次弱阳性质控品（HBsAg），有4次S/C.O为0.9，这4次中HBsAg介于0.8-1.0之间病人标本有13份（4批次共检测病人标本360份），经过重新检测这13份标本（弱阳性质控品HBsAg的S/C.O为1.5），有8份HBsAg的2.0S/C.O1.0,用电化学发光检测，结果与复检结果一致。举例3：“半固定”范围法（二）举例3：“半固定”范围法（二）共70批次，有6批次HBeAbS/C.O大于1.0(介于1.0-1.4)，在这6批次中，HBeAb的S/C.O介于1.0-1.4之间的病人标本有31份（6批次共检测病人标本540份）,乙肝血清标志物HBsAg和HBcAb阳性9例，单独HBcAb阳性22例，经过重新检测这31份标本（弱阳性质控品HBeAb的S/C.O为0.8），有17份HBeAb的S/C.O1.0,将这31例血清用电化学发光检测结果与重新检测结果一致。定性试验特有质控方法按照ISO15189对定性试验质控要求：每批试验，要求有阴性、弱阳性、阳性质控品同步检测。质控品来源：购买、自制（要求稳定性）方法：每批试验均带质控品记录：“在控”、“失控”，无需作图“弱阳性”的界定：目前行业比较一致的观点定性试验特有质控方法失控后的处理关键：失控原因的分析关键：失控原因的分析原则：实事求是原则：实事求是失控原因的分析与处理1.不同方法间不一致:分析：不同方法灵敏度、特异性差异处理：如果试剂都经过评价、合格，结果可以不一致,但是不能相差太远2.ELISA检测主要影响因素:①标本的质量分析：常见是离心不好，有凝块处理：去除后重新检测失控原因的分析与处理②加酶结合物前放置不同时间对竞争法的影响分析：加样时间太长引起（手工法影响大）处理：熟练操作，尽量在5分钟时间内加完③温育分析：温育时间是否满足试验条件处理：水孵育时间与空气孵育时间应该不同（需验证）失控原因的分析与处理④洗板分析：洗板不彻底往往阳性成片出现或弱阳性太多处理：观察洗板机，及时解决，标本重新检测3.可能导致假阳性结果的标本因素内源性干扰因素:如类风湿因子、补体、嗜异性抗体、溶菌酶;外源性干扰因素:如溶血、细菌污染、标本保存时间过长、凝固不全。分析：结果与历史结果不一致或与病人实际情况矛盾处理：建议重新留取标本失控原因的分析与处理4.结果不一致另外的主要原因:“张冠李戴”分析：抽血没有核对相关信息处理：重新抽血5.实验室操作时差的影响（手工操作）分析：质控与以前的质控结果相差太远处理：部分标本需重新检测或复核6.边缘效应：聚苯乙烯属不良热导体，使得在温育的时间内加热不均匀，产生热力学梯度，使得周边颜色深，中间浅（一般用水浴基本可以排除改因素影响）。失控原因的分析与处理临界结果的处理对策①建立进一步检测的程序;②标本的重复检测;③第二份标本的检测(另取标本);④数周或数月后采取标本检测;⑤可能的话,用另一个更敏感特异的方法检测;⑥检测标准化。失控后相应处理（举例）以HBsAg为例（弱阳性质控品失控）①S/CO4.0检测“阳性”结果的标本，建议采用快速检测方法（如金标）复检，结果一致可发报告，不一致需复检。②S/CO1.0检测为“阴性”结果的标本，如果其它几项标志物均为阴性、或HBsAb阳性，可发“阴性”报告，其余情况需复检。质量保证1.人员的培训2.试剂的选择3.仪器设备的检定和维护移液器、温育箱（水浴箱）、酶标仪4.样本的选取避免溶血、脂血、凝集不全、污染标本5.样本的保存6.室内质控、室间质评小结总之，做好质控，首先要严格按照操作规程进行操作，然后应选好合适的质控品和质控规则，定期总结，才能不断提高，做好室内质控是提高实验室检验质量的最基本措施。当然，单纯靠室内质控还不行，还要建立健全的各项实验室规章制度，操作人员掌握质量控制知识，做好预防性质量控制，保证标准品的质量等全过程的质量控制，从而提高检验质量。谢谢大家谢谢大家Thankyou!——原创PPT设计——谢谢大家!谢谢大家!