湿化液实验样品中细菌总数的检测

湿化液实验样品细菌总数的检测一、测定方法平皿计数法二、取样方法无菌操作法三、测定范围湿化液实验样品中细菌总数的检测四、测定原理细菌总数是指样品在一定条件下培养后（培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL样品所含菌落的总数。五、检测目的探讨能使加湿液达到无菌要求的原材料的最小比例。六、检测人湖南昊康医疗有限公司品管部彭倩七、实验结果记录1、实验时间：9月14日配样环境：办公大厅原料以变性淀粉：溶菌酶：甘氨酸=1:0.2:1，用饮用纯净水配制样品，细菌总数见表1。表1（48h后）稀释度菌落数10010-110-210-310-4菌落总数（cfu/ml）原比例3005111506203007212412、实验时间：9月16日配样环境：办公大厅分析实验1，加湿液中细菌总数较多，可能是由于溶菌酶的添加量较少，而出现这种情况。下面，将会增加溶菌酶的量，确保加湿液达到无菌要求。原料在原比例（变性淀粉：溶菌酶：甘氨酸=1:0.2:1）的基础上增加酶的比例为0.4‰，减少甘氨酸的比例为0.5‰，其余原料比例不变，用饮用纯净水配制样品，细菌总数见表2。表2（48h后）稀释度菌落数10010-110-210-3菌落总数（cfu/ml）0.02300342134030011203、实验时间：9月21日配样环境：办公大厅由表1和表2比较可知，增加每酶的量，由于在变性淀粉比例为1‰、酶比例为0.4‰、甘氨酸比例为0.5‰配比下，加湿液仍不能达到无菌要求，的原料在原比例的基础上增加酶的比例分别为0.3‰、0.4‰、0.5‰，其余原料比例不变，用饮用纯净水配制样品，细菌总数见表2。表3（48h后）稀释度菌落数10010-110-2菌落总数（cfu/ml）0.03300982394030090170.043006946903002950.05531117291134结果发现所有的培养基上都长了一种白色小点点的菌落，且继续培养，菌落不再长大。初步推测白色小点菌落形成原因可能为：细菌被酶作用后，由于酶作用时间不长或是酶含量过少，细菌并未完全溶解或死亡，而是以原生质体形态存在于湿化液中，再经过培养后，原生质体再生，而形成白色小菌落。4、实验时间：9月26日配样环境：实验室因有关资料显示酶的最适比例为0.5‰，甘氨酸的最适比例为2.5‰，故在下面的实验中，添加甘氨酸的比例为2.5‰，以酶在0.4‰、0.5‰的比例下作对比，且实验样品添加的水为无菌的饮用纯净水结果见表4和表5。培养24h后，所有稀释度均为菌落的生长，结果见表4。继续培养，48h后，发现有些稀释度有丝状微生物生长，初步推断为霉菌（可能性较大）或是放线菌，结果见表5。表4（24h后）稀释度菌落数10010-110-2菌落总数（cfu/ml）0.04000100000.0500010000表5（48h后）稀释度菌落数10010-110-2菌落总数（cfu/ml）0.044111005100.05030302005、实验时间：9月28日配样环境：实验室酶和甘氨酸分别以0.5‰、2.5‰的比例，其它原料比例不变，以灭菌饮用纯净水和未灭菌饮用纯净水做对比，结果见表6。表6（24h后）稀释度菌落数10010-110-2菌落总数（cfu/ml）灭菌水0000000未灭菌水134040800实验结果：在采用灭菌饮用纯净水配制样品的培养基上未长白色一点菌落。而在采用未灭菌饮用纯净水配制样品的培养基上都长有一群白色的一点菌落，且在稀释度为10-2的培养基上，白色一点菌落比较少，继续培养，在稀释度为10-2的培养基上的白色小点菌落直径变大。注：1）首先选择平均菌落数在30～300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数；若大于2则报告其中稀释度较小的；若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数。3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。6）若所有稀释度的均无菌落生长，则以小于1乘以稀释倍数报告之。7）菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。