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2008-2009学年第一学期本科试卷课程名称:工业微生物学实验(B）答案第1页（共6页）学院:专业:学号:姓名:―――――――――――――装――――――――――――订――――――――――――线――――――――――――――学院一、名词解释（共16分，每小题4分）1．大肠菌群大肠菌群系指一群在37℃、24h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。2．培养基是人工配制的能满足微生物生长繁殖和积累代谢产物的营养基质。3．无菌操作培养基经灭菌后，用经过灭菌的接种工具在无菌条件下接种含菌材料于培养基上，这一操作称为无菌操作。4．假菌丝酵母生长旺盛时，出芽形成的芽细胞尚未脱离母细胞又长出了新芽，容易形成成串的细胞。如果各细胞之间连接处面积小于细胞直径，形成的这种藕节状的细胞串称为假菌丝。二、填空题（共30分，每空1分）1.微生物培养基的分类方法和种类很多，如按培养基中凝固剂含量的多少可分为固体、半固体和液体培养基；按照培养基的原料来源可分为天然、合成和半合成培养基，如PDA培养基根据其原料来源属于其中的半合成培养基。题号一二三四五六七八总成绩得分得分得分年级：06级专业：生物工程（本科）课程号：S040101046第2页（共6页）2.培养基的灭菌一般多采用高压蒸气灭菌，灭菌压力为0.1Mpa，即121℃，时间为20min，若培养基中含糖成分的含量较高，一般多采用过滤除菌或减压灭菌，灭菌温度为115℃。3.对不同的微生物进行斜面接种时，常根据需要采用不同的接种方法，如细菌和放线菌多采用密波状蜿蜒划线，酵母菌多采用中央划线法，用来观察菌种的形态和培养特征；霉菌多用点接法。4.显微测微尺主要由目镜测微尺和镜台测微尺组成.在进行细胞大小测定之前,目镜测微尺要先进行标定。5．枯草芽孢杆菌经过革兰氏染色后，菌体部分呈紫色，芽孢颜色为无色。6．三糖铁高层琼脂斜面中含有的糖主要有葡萄糖、乳糖和蔗糖三种，培养基中加入了指示剂酚红,它在pH小于6.8时为黄色,大于8.4时为红色。伤寒沙门氏菌在该培养基里生长时，只能利用葡萄糖产酸，产酸量也小。处于高层琼脂斜面表面的有机酸有的挥发，有的被氧化，很快消失。因此，表面黄色在短时间内也消失了。又因伤寒沙门氏菌分解氨基酸等产生碱性物质，所以高层琼脂斜面表面又转成红色。而底层在比较短的培养时间为黄色。而大肠杆菌在该培养基中生长时，能利用其中所有的糖，培养基上下全为黄色。7．根据微生物菌种保藏的原理，一般微生物菌种保藏常需满足的条件是：低温、干燥、__缺氧（隔绝空气）。8．糖发酵实验中加杜氏管的目的是便于观察产气现象。9.乳糖胆盐发酵培养基（大肠菌群测定）中加入胆盐的目的是抑制革兰氏阳性菌的生长。10．革兰氏染色中对染色标本进行固定的目的是：杀死微生物固定细胞结构、防止标本被水冲掉、改变染料对细胞的通透性。2008-2009学年第一学期本科试卷课程名称:工业微生物学实验(B）答案第3页（共6页）学院:专业:学号:姓名:―――――――――――――装――――――――――――订――――――――――――线――――――――――――――学院三、判断题（共8分，每小题1分）1．使用手提灭菌锅灭菌后,为尽快排除锅内蒸汽,可直接打开排气阀排气。（×）2．霉菌中有足细胞的霉菌为根霉。（×）3．明胶液化实验，明胶的水解是由于细菌所产生的淀粉酶的作用。（×）4．大肠杆菌和八叠球菌为革兰氏阴性菌，革兰氏染色后菌体呈红色；枯草芽孢杆菌为革兰氏阳性菌，革兰氏染色后菌体呈紫色。（×）5．培养基的pH值在加热灭菌后会下降0.3~0.4，因此配制时的pH值要比要求的略高一些。（√）6．镜台测微尺每小格的实际长度是10微米。（√）7．实验室做固体培养基，常加2%的琼脂作凝固剂，做半固体培养基时，琼脂加入量通常是1%。（√）8．血球计数板计数区的面积是1mm2。（√）四、简答题（共36分，每题6分）1．列表说明细菌、酵母、霉菌的培养基种类，培养温度，PH值，个体形态的观察方法。菌种培养基温度PH值个体形态观察细菌肉汤培养基37℃7.2－7.4染色后用油镜酵母麦芽汁（或PDA，YEPD）25－30℃5.3－6.0水浸片高倍镜霉菌麦芽汁（或察氏培养基）28－30℃6.6－6.7乳酸苯酚油做介质制片，高倍镜观察2.简述酵母菌死亡率测定的原理。答：死亡率测定的原理：活的微生物，由于不停的新陈代谢，使细胞内氧化还原得分得分年级：06级专业：生物工程（本科）课程号：S040101046第4页（共6页）值低，且还原能力强。当某种无毒的染料进入活细胞后，可以被还原脱色；当染料进入死细胞后，这些细胞因无还原能力或还原能力差而被着色。在中性和弱酸性条件下，活的细胞原生质不能被染色剂着色，若着色则表示细胞已经死亡，故可以此来区分活菌和死菌。方法：取0.05%美蓝液一滴，置载玻片中央，然后取酵母液少许加入美蓝液中混匀，染色2~3分钟，加盖片，于高倍镜下进行观察，并计数已变蓝的细胞（可计5~6个视野的细胞总数）。计算公式：3.简述湿热灭菌比干热灭菌更有效的原因。答：在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。4.简述革兰氏染色的原理和操作步骤。答：革兰氏染色的机理主要是利用两类细菌的细胞壁成分和结构的不同。革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的类脂质，而肽聚糖的含量较少。当用乙醇或丙酮脱色时，类脂质被溶解，增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后，又染上复染剂的颜色。而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的含量多且交联度度大，类脂质含量少，经乙醇或丙酮洗脱后，肽聚糖的孔径变小，通透性降低，因此细胞仍保留初染时的颜色。革兰氏染色的一般过程主要包括制片，固定，结晶紫初染1分钟，碘液媒染，95%乙醇脱色30s，番红复染30s，水洗和镜检等步骤。2008-2009学年第一学期本科试卷课程名称:工业微生物学实验(B）答案第5页（共6页）学院:专业:学号:姓名:―――――――――――――装――――――――――――订――――――――――――线――――――――――――――学院5．简述细菌生理生化实验中石蕊牛乳实验中细菌对牛奶作用的情况。答：⑴产酸：细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红。⑵产碱：细菌分解酪蛋白产生碱性物质，使石蕊变蓝。⑶胨化：细菌产生蛋白酶，使酪蛋白分解，故牛奶变得比较澄清。⑷酸凝固：细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红，当酸度很高时，可使牛奶凝固。⑸凝乳酶凝固：有些细菌能产生凝乳酶使牛奶中的酪蛋白凝固，此时石蕊呈蓝色或不变色。⑹还原：细菌生长旺盛时，使培养基氧化还原电位降低，因而石蕊褪色。6.简述青霉和曲霉小室培养的操作过程。答：曲霉和青霉的小室培养接种：取一培养皿，内放一层吸润20%甘油（可以用水代替）的滤纸，放U形玻棒。（1分）取一干燥无菌的载玻片和盖玻片，于载玻片的一边滴加融化的PDA（或察氏培养基），点种孢子，并将盖玻片盖与其上（2分）；要求中央的培养基直径不大于0.5cm，盖、载玻片间距离不高于0.1mm。（1分）然后将制好的载片放入培养皿中的玻棒上，盖好皿盖，30℃正置培养。可以在培养不同时间直接置干燥系物镜下观察（1分）。五、实验设计题（共10分）一家饮料厂新开发了一种新型果味饮料，以玻璃瓶包装，产品出厂前需要你设计一个实验来检测包装后的饮料成品中大肠菌群数是否超标。简述测检食品中大肠菌群的意义并设计实验方案。1．测检食品中大肠菌群的意义大肠菌群主要来源于人畜粪便，以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。2.检样稀释(1)以无菌操作将检样25ml（25g）放入盛有225ml无菌生理水的三角瓶（瓶得分年级：06级专业：生物工程（本科）课程号：S040101046第6页（共6页）内预置适当数量的玻璃珠）内，经充分振荡作成1:10的均匀稀释液。用1ml无菌吸管吸取1:10稀释液1ml，注入含有9ml无菌生理盐水的试管内，振摇试管使管内溶液混均，作成1:100的稀释液。另取1ml无菌吸管，按上项操作依次作10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml无菌吸管。根据食品卫生标准要求或对被检样品污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种乳糖胆盐发酵管3支。3.乳糖胆盐发酵将被检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃培养箱内，培养24±2h，如果所有糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，继续进行检验。4.分离培养将产气的发酵管的菌液分别划线接种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养箱内，培养18～24h，观察菌落形态，并作革兰氏染色和复发酵证实试验。5.复发酵证实试验在伊红美蓝琼脂平板上挑取：①紫红色、具有金属光泽的菌落；②深红色、不带或略带金属光泽的菌落；③淡红色、中心着色较深的菌落。具有以上特征的菌落为可疑菌落，挑取1～2个进行革兰氏染色，同时对应接种到乳糖发酵管内进行复发酵，置36±1℃培养箱培养24±2h，观察产气情况。凡在乳糖发酵管内产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即报告为大肠菌群为阳性。6.报告根据复发酵证实试验得到大肠菌群阳性管的管数，查MPN检索表，报告每100ml（或100g）检样中大肠菌群的最可能数。