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ELISA试验主要操作步骤的技术要求和注意事项一．试剂的准备1.放冰箱内保存的试剂、在使用前应先恢复到室温。2.仔细检查试剂各组分是否变质3.保存试剂的冰箱应定期检查其贮存温度（正常为2-8℃），并尽量避免冰箱频繁开关二．溶解冻干品，加样品稀释液后，保证充分溶解，反复颠倒。三．加样1．严格按照说明书要求，按规定的量和顺序进行2．使用的微量加样器应注意保养并定期校正3．加样前应使溶液充分混匀，并将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，注意不可出现气泡。加样前要看移液器的液面是否平齐。4．加样时避免样本溅出，如有样本溅出孔外时，应用吸水纸轻轻拭干，并做相应记录5．加样后微孔板应及时温育，尽量缩短加样后温育前的等待时间6.如果加样枪漏气以至于加样的量不够，不能用枪吸出再加。避免污染整条甩掉再重新加。四．温育1．严格按照说明书要求，按规定的温度和温育时间进行2．为避免孔内液体蒸发，可用封板胶将ELISA板面密封后进行温育3．温育时尽量少开启恒温箱门，不能人为缩短或延长温育时间五．洗板1．洗板时需保证微孔板平放，将洗涤液注满各孔，但尽量避免漏液溢液现象2．每次洗板的液体残留量不宜过多，洗完后，应将微孔板在吸水纸上轻轻拍干。3．配置洗涤液需要新鲜无污染的蒸馏水或去离子现配现用。六．显色1．不使用过期显色剂，肉眼可见浅兰色的TMB显色剂不能使用。2．显色剂避免在空气中暴露时间过长。3．加显色剂尽量避免溅出孔外。七．终止显色完后应及时终止，加终止液时避免出现气泡八．结果判断1．酶标仪读数时应保证微孔板底部清洁，定期清洗酶标仪滤光片。