抗凝剂的选择

抗凝剂的选择概述使用全血和血浆检查，通常采集静脉血，需要使用抗凝剂。所谓抗凝，是用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固。这种能够阻止血液凝固的物质，称为抗凝剂或抗凝物质。检查的项目不同，所使用的抗凝剂也不同。实验室常用抗凝剂•乙二胺四乙酸（EDTA）盐•草酸盐•肝素•枸橼酸盐1.1乙二胺四乙盐（EDTA）常用其钠盐（EDTA-Na2-H2O）或钾盐（EDTA-K2-2H2O），能与血液中钙离子结合成螯合物，而使ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。Na2C10H14O8N2+Ca2+CaC10H12O8N2+2Na++2H+EDTA盐对血细胞形态和血小板计数影响很小，适用于多项血液学检查，尤其是血小板计数，但钠溶解度明显低于钾盐，有时影响抗凝效果。EDTA-K2特别适用于全血细胞分析及血细胞比容测定，室温下6h，红细胞体积不改变。根据国际血液学标准化委员会（ICSH）1993年文件建议，血细胞计数用EDTA-K2作抗菌素凝剂，用量为EDTA-K2-2H2O1.5~2.2mg/ml血液。EDTA影响血小板聚集，不适合于作凝血象检查和血小板功能试验。1.2EDTA在检验中的几点注意事项1.抗凝剂浓度过高，渗透压上升，会造成细胞皱缩。EDTA溶液pH与盐类关系较大，低pH可使细胞膨胀。EDTA-K2可使红细胞体积轻度膨胀，采血后短时间内平均血小板体积非常不稳定半小时后趋于稳定。2.EDTA-K2使Ca2+、Mg2+下降，同时使肌酸激酶、碱性磷酸酶降低，EDTA-K2的最佳浓度为1.5mg/ml血液，如果血少，中性粒细胞会肿胀分叶消失，血小板会肿胀、崩解，产生正常血小板的碎片，使分析结果产生错误。3.EDTA由于能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成时纤维蛋白单体的聚合，不适于血凝和血小板功能检测，也不适用于钙、钾、钠及含氮物质的测定。4.此外，EDTA能影响某些酶的活性和抑制红斑狼疮因子，故不适合制作组化染色和检查红斑狼疮细胞的血涂片。5.EDTA也可影响到中性粒细胞的形态学特征。这种变化取决于外周血涂片制备的时间和EDTA的浓度。即使EDTA浓度在最佳浓度－1.5mg/ml血液时，也会引起中性粒细胞发生微小的形态学变化。这种变化首先包括中性粒细胞肿胀、分叶结构的消失，随后发生胞浆颗粒的丧失及核和胞浆出现空泡。在标本采集后1－3h间，发生核肿胀，核染色质发生交叉，3h后，中性粒细胞结构模糊并发生碎裂。如果EDTA浓度采用2.5mg/ml时，中心粒细胞及乎全部发生碎裂。6.单核细胞也可发生类似的与时间相关及与EDTA浓度相关的形态学变化，但在程度上轻于中性粒细胞。血小板同样会发生变化，包括肿胀，产生巨血小板，后者发生碎裂后可产生与血小板大小一致的碎片，用电子计数仪计数时导致血小板假性升高。用EDTA作抗凝剂时血小板从盘型变为球形，从而使平均血小板体积测定结果不准确。2.1草酸盐常用的有草酸钠，草酸钾和草酸铵，它们溶解后离的草酸根与标本中的钙离子形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能。Na2C2O4+Ca2+CaC2O4+2Na+草酸盐抗凝的优点是溶解度好，价廉。2mg草酸盐可抗凝1ml血液。草酸钠通常用0.1mol/L浓度，与血液按1:9比例使用，过去主要用于凝血象检查。实践发现，草酸盐对凝血V因子保护功能差，影响凝血酶原时间测定；另外由于草酸盐与钙结合后形成的沉淀物，影响自动凝血仪的使用，因此，多数认为，凝血象检查选用枸椽酸钠为抗凝剂更为适宜。高浓度钾离子或钠离子易使血细胞脱水皱缩，而草酸铵则可使血细胞膨胀，故测定血细胞比容时用草酸铵和草酸钾或草酸钠两者适当比例混合的抗凝剂，恰好不影响红细胞的形态和体积。2.2草酸盐在检验中的几点注意1.若用草酸钾或草酸钠作抗凝剂，与肝素为抗凝剂测定的血细胞比容比较，测定值可降低8%~13%，此时的血浆量也相应增加；用它测定血浆中化学成分，结果可低5%左右。2.标本中如加入高浓度的草酸盐抗凝剂，可发生溶血和改变血液pH，干扰血浆中的钾，钠和氯测定，还能抵制有些酶的活性。3.由于生成草酸钙沉淀，红细胞会出现锯齿状，白细胞出现空泡，淋巴细胞及单核细胞会变形，不宜做血片检查。4.草酸盐可使血小板聚集，并影响白细胞形态，不能用于白细胞和血小板分类计数。3.1肝素的一般特性‗肝素是生理性抗凝剂，广泛存在于肺，肝，脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的粘多糖，相对分子质量15000，带有较多负电荷。抗凝机制较为复杂，主要是加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶的作用，从而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用。此外，肝素还能借助血浆辅助因子（肝素辅助因子Ⅱ）来抑制凝血酶。每毫升血液抗凝需要肝素（1.5±2.5)IU，所用制剂多为肝素的钠盐或钾盐。肝素具有抗凝力强，不影响血细胞体积，不易溶血等优点。除有些因素会干扰凝血机制检查项目外，绝大多数的检查都可用肝素作为抗凝剂，它是红细胞渗透脆性试验理想的抗凝剂。尽管肝素可以保持红细胞的自然形态，但由于其常可引起白细胞聚集，并使血涂片在罗氏染色时产生蓝色背景，因此肝素抗凝血不适合血液学一般检查。3.2肝素的药理学特性•肝素与抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）结合后，引起ATⅢ构型改变，并明显提高ATⅢ抗凝血酶的效能和缩短起效时间；•同时主要与蛋白水解酶性凝血因子（Ⅻa,Ⅺa,Ⅹa,Ⅸa）及激肽释放酶分子结构中的丝氨酸残基结合，并封闭这些酶的活性中心，呈现不可逆性阻断这些因子的凝血作用；•促进纤维蛋白对凝血酶的吸附，抵制血小板的粘附和聚集，并影响凝血过程的每一步骤，使凝血时间，全血激活凝血时间（ACT）凝血酶时间及凝血酶原时间延长。3.3肝素在检验中的几点注意•常用肝素抗凝剂是肝素的钠、钾、锂、铵盐，其中以肝素锂最好，但其价格较贵，钠、钾盐会增加血液中的钠、钾含量，铵盐会增加尿素氮的含量。•肝素对血液成分干扰较少，不影响红细胞体积，不引起溶血，适用于做红细胞渗透性试验、血气、血浆渗透量、红细胞压积及普通生化测定。•肝素具有抗凝血酶作用，不适合做血凝试验。•肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，所以不适合做白细胞分类和血小板计数，更不能用于止血检验。•肝素抗凝血不能用于制作血涂片，因为Wright染色后出现深蓝色背景，影响显微镜减产。•肝素抗凝血应于短时间内使用，否则放置过久血液又可凝固。4.1枸椽酸盐主要为枸橼酸三钠，凝血试验时枸橼酸盐能与血液中的钙离子结合形成螯合物，从而阻止血液凝固。2Na3C6H5O7+2Ca2+2CaC6H5O7-+6Na+枸橼酸钠与血液的比例为1:9。枸橼酸盐在血中的溶解度低，抗凝力不如前几钟抗凝剂。多用于临床血液学检查，一般用于红细胞沉降率和凝血功能测定。因其毒性小，也是输血保养液的成分之一。4.2枸橼酸盐在检验中的几点注意•大部分凝血试验都可用枸橼酸钠抗凝，它有助于Ⅴ因子和Ⅷ因子的稳定，并且对平均血小板体积及其他凝血因子影响较小，可用于血小板功能分析。•枸橼酸钠6mg才能抗凝1ml血液，碱性强，不适用于血液化验和生化测验。•在正常输血速度下，枸橼酸钠不会出现不良反应，当输血速度太快或输血量太大（1000ml）以上时，因枸椽酸盐不能及时被氧化，可致低钙血症，引起抽搐和心肌收缩抑制。•当肝肾功能不全或新生儿酶系统发育不全，不能充分代谢枸椽酸钠，即使缓慢输血也可能出现血钙过低现象。•为预防枸椽酸盐中毒反应，大量输血时可静脉注射适量葡萄糖酸钙或氯化钙。一般每输注1000毫升含枸椽酸钠血可静脉注射10%葡萄糖酸钙10毫升或5%氯化钙10毫升，以中和输入的大量枸椽酸钠，防止低钙血症发生。钙剂应单独注射，不能加入血液中，以免发生凝血。•大量输入含枸椽酸钠（超过4000毫升）血液时，可能出现出血倾向。其原因之一可能是枸橼酸钠使毛细血管张力降低引起血管收缩不良所致。临床检验中常用抗凝剂抗凝剂浓度及主要用途肝素分子量3－30KD,锂盐、钠盐、铵盐较常用,肝素锂最适合于血浆化学测定,常用浓度14.3U/ml血液;钙滴定、电解质平衡、锌锂滴定的肝素最适合于离子钙测定。EDTAEDTA盐一般用于常规血液学检验（二钾或三钾盐，二钠盐）常用浓度为1.5mg/ml血液。枸橼酸盐一般用于常规凝血试验，枸橼酸三钠－二水合物常用浓度为3.2%或3.8%。谢谢！