1.实验目的1.1了解紫外可见分光光度计的食用方法及基本结构1.2掌握用紫外可见分光光光度法进行定性分析和定量分析的方法2.实验原理2.1定性分析不同物质的分子结构不同,因此各种物质各有其特征的紫外可见光吸收光谱。以波长为横坐标,吸光度为纵坐标作图,得到的曲线称为吸收光谱曲线,他能清楚的描述该物质对不同波长光的吸收情况。光吸收程度最大处叫做最大吸收波长,用λmax表示。浓度不同时,光吸收曲线的形状相同,最大吸收波长不变,只是相应的吸光度大小不同。说明吸收曲线的形状只与物质的本性有关,而与物质的浓度无关。因此,我们可以利用吸收曲线对物质进行定性分析。2.2定量分析根据朗伯-比尔定律:A=εbc,式中A—吸光度,ε—摩尔吸光系数,b—液层厚度cm,c—浓度,mol/L当液层厚度b固定时,吸光度正比于浓度,因此可采用标准曲线法对物质进行定量分析。通常选择最大吸收波长进行定量分析,以提高分析灵敏度和消除干扰影响。3.仪器及试剂3.1仪器及配件UV1800PC型紫外可见分光光度计,1cm石英比色池3.2试剂3.2.1虾青素标准溶液3.2.1.1标准储备液(浓度为1.0mg/mL)称取10mg虾青素标准品溶于二甲基亚砜(DMSO),定容至10mL,摇匀,避光-20℃保存。3.2.1.2标准系列溶液的配制用移液管分别量取0.5,1.0,2.0,3.0mL标准储备液,分别用50mL容量瓶定容,稀释溶剂为无水乙醇,定容之后摇匀,避光放置。3.2.2未知浓度的虾青素样品溶液。4.实验内容4.1不同浓度的虾青素溶液吸收曲线的比较。4.2标准曲线的制作。4.3样品溶液的测定。5.仪器操作步骤5.1开机,自检,预热20分钟5.2放置样品将配好的样品转入比色池,比色池要用蒸馏水和待测溶液润洗,溶液装至比色池的1/2~2/3左右。装好后用纸巾吸干比色池表面的液体,将比色池放入样品槽中,注意比色池透光面要对住样品槽有孔的一边。5.3全波长扫描将不同浓度的标准品依次转入比色池中进行全波长扫描,比较其吸收曲线和最大吸收峰对应的波长。5.4制作标准曲线取不同浓度的标准品最大吸收波长处的吸光值绘制标曲。5.5样品浓度的测定6.注意事项6.1拿比色池要拿毛玻璃面,放置比色池要使毛玻璃面向下,以免影响透光面的透光性。6.2比色皿按材质分为几种,使用时需根据样品的性质选择不同材质的,石英比色池价格昂贵,要小心使用。7.实验报告内容:1)目的2)原理3)简单操作步骤4)实验结果(全波长扫描图、标准曲线、样品浓度的计算,定性定量依据)5)注意事项(就自己的学习和体会写几点)